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    2024年第32卷第4期
    • 李高峰,刘淑娟,李亚,李素云,范正媛,沈婷婷

      2024,32(4):411-422, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2024. 04. 001

      Abstract:

      目的 探究调补肺肾三法对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)稳定期大鼠气道黏液高分泌的影响及作用机制。 方法 90 只大鼠随机分为对照(Control)组、模型(COPD)组、补肺健脾(Bu-Fei Jian-Pi Formula,BJF) 组、补肺益肾( Bu-Fei Yi-Shen Formula,BYF) 组、益气滋肾(Yi-Qi Zi-Shen Formula,YZF)组、ERK1 / 2 抑制剂(PD98059)组、补肺健脾联合抑制剂(BJF + PD98059) 组、补肺益肾联合抑制剂(BYF +PD98059)组和益气滋肾联合抑制剂(YZF + PD98059)组。 第 1 ~ 8 周采用香烟烟雾暴露联合细菌反复感染的方法建立 COPD 大鼠模型,9 ~ 16 周 Control 组和 COPD 组给予生理盐水每只 2 mL,BJF 组、BYF 组和 YZF 组分别给予对应的调补肺肾三方灌胃,第 16 周 PD98059 组、BJF + PD98059 组、BYF + PD98059 组和 YZF + PD98059 组给予PD98059 腹腔注射 7 d。 16 周结束后取材,检测大鼠肺功能、肺组织形态、肺组织水含量、BALF 中炎性细胞计数和血清炎性因子水平。 AB-PAS 染色和免疫组化法分别检测杯状细胞比例和 Muc5AC、Muc5B 表达。 PCR 检测ERK1、ERK2、ENaC、CFTR、AQP5 mRNA 表达。 Western Blot 测定肺组织中 ERK1 / 2、P-ERK1 / 2 蛋白表达。 结果 与Control 组相比,COPD 组大鼠 TV、MV、FVC、FEV0. 1 及 FEV0. 1/ FVC 均显著下降(P< 0. 01);肺病理显示肺泡紊乱,肺泡壁大量断裂,气管壁严重皱缩增厚,周围有大量炎性细胞浸润;肺组织水含量明显升高(P< 0. 01);BALF 中巨噬细胞比例显著降低(P< 0. 01),中性粒细胞和淋巴细胞比例显著升高(P< 0. 01);血清炎性因子 TNF-α、IL-1β水平显著增高(P< 0. 05,P< 0. 01);气道上皮杯状细胞比例和 Muc5AC、Muc5B 表达水平均显著升高(P< 0. 01);肺组织 ERK1、ERK2、ENaC mRNA 表达量均明显升高(P< 0. 01),CFTR 和 AQP5 mRNA 的表达均明显降低(P<0. 01);肺组织 P-ERK1 / 2, ERK1 / 2 表达明显升高(P< 0. 01);与 COPD 组相比,各治疗组能不同程度改善上述指标变化(P< 0. 05,P< 0. 01),调补肺肾三方联合 PD98059 组治疗效果优于单一治疗组(P< 0. 05,P< 0. 01)。 结论 调补肺肾三法通过抑制 ERK1 / 2 信号通路改善 COPD 大鼠气道黏液高分泌。

    • 樊懿萱,王心威,李军梅,易亮,杨志旭

      2024,32(4):423-434, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2024. 04. 002

      Abstract:

      目的 基于 NLRP3 / Caspase-1/ GSDMD 焦亡通路,建立随时间变化的脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠模型,观察不同时间点小鼠肺损伤情况,根据不同时间伤情的变化和焦亡通路相关蛋白的表达,综合筛选出最佳造模时间点,为后续实验奠定动物模型基础。 方法 54 只 6 ~ 8 周龄 SPF 级雄性 BALB/ c 小鼠,随机分为 9 组,空白对照组(Con 组)和造模时间组(1、3、6、12、18、24、48 和 72 h 组),分别检测体重、肺组织大体、病理观察及半定量评分、肺指数、肺含水量及湿干重比;取肺泡灌洗液检测白细胞计数,TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18 及 BCA 蛋白浓度;使用Western Blot 检测肺组织中经典焦亡通路相关 NLRP3、pro-Caspase-1、Caspase-1、GSDMD 蛋白的表达。 结果 根据体重统计,各组均有下降,24 及 48 h 组下降最为明显;通过肺组织大体、病理观察及评分发现,24 ~ 72 h 肺组织损伤严重,每组与 Con 组比较均有统计学意义;肺指数、肺含水量及湿干重比在 24 ~ 72 h 明显升高;肺泡灌洗液中白细胞从造模后 6 h 开始升高,48 h 可达峰值,至 72 h 均维持上升状态;灌洗液中 IL-18 在 24 h 开始升高,72 h 仍然持续升高;TNF-α、IL-1β、IL-6 炎症因子在 6 h 时均保持最高水平状态,在 48 h 明显降低;灌洗液中蛋白浓度在 24、48及 72 h 与 Con 组相比均有明显升高;通过 Western Blot 检测发现,ALI 模型各个时间组焦亡通路蛋白 NLRP3、proCaspase-1、Caspase-1 与 GSDMD 蛋白表达均有上调,24 ~ 72 h 组的通路蛋白表达与 Con 组相比明显增强。 结论综合分析不同时间组中各项实验指标、炎症因子及 Western Blot 中通路蛋白的表达,发现焦亡机制与 ALI 的发生与进展密切相关,并随时间迁移。 从实验结果得知 24 ~ 48 h 肺损伤程度严重,肺损伤相关指标及通路蛋白具有研究意义,可作为造模时间参考。 也为后续研究 ALI 的具体机制及干预靶点提供了模型参考与实验基础。

    • 李笑汝,姚新叶,刘佳,张小玉,张依曼,来宝长,马强,王一东,田红燕,殷倩

      2024,32(4):435-443, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2024. 04. 003

      Abstract:

      目的 采用非 Langendorff 方法分离成年小鼠心肌细胞(adult mouse cardiomyocytes,AMCMs),并建立腺病毒转染及缺氧/ 复氧诱导细胞损伤模型,为应用 AMCMs 进行心肌缺血体外实验的研究提供便捷、实用、可操作性强的系统方法。 方法 应用非 Langendorff 方法分离 AMCMs,观察贴壁后 2、24、48 及 72 h 细胞的形态,计算存活率,并应用 α-actinin 免疫荧光染色观察 AMCMs 完整性;应用腺病毒转染 AMCMs,观察并统计转染 36、48 h 后的转染效率;通过缺氧 45 min / 复氧 24 h,进行碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色,统计 PI 阳性细胞率以明确缺氧/ 复氧损伤模型的建立。 结果 与 AMCMs 贴壁后 2 h 相比,贴壁后 24 和 48 h 的细胞存活率无显著下降,贴壁后 72 h的细胞存活率显著下降;AMCMs 细胞结构完整,可进行腺病毒转染,36 和 48 h 转染效率分别可达 82. 07% ±0. 60%和 82. 84% ± 1. 18%;缺氧/ 复氧诱导 AMCMs 可成功建立细胞损伤模型,PI 染色阳性细胞达 42. 28% ±3. 10%。 结论 本研究应用非 Langendorff 方法分离培养的 AMCMs,细胞存活率高,并建立腺病毒转染和缺氧/ 复氧诱导细胞损伤模型,为体外建立 AMCMs 基因修饰、缺氧/ 复氧损伤模型提供了简单易行的系统方法。

    • 孟雪,王新洲,高水波,吴鸿

      2024,32(4):444-450, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2024. 04. 004

      Abstract:

      目的 建立巨噬细胞特异性敲除 Kruppel 样因子 2( kruppel-like factor 2,KLF2)基因小鼠模型,探讨KLF2 对巨噬细胞炎症反应的调控作用。 方法 运用 CRISPR/ Cas9 基因编辑技术构建 KLF2 flox / + 小鼠。 通过与Lyz2-Cre + / +小鼠繁育得到目的基因型小鼠,通过基因型鉴定、实时荧光定量-聚合酶链反应( qRT-PCR)、Western Blot 从 DNA、 RNA、 蛋 白 水 平 验 证 KLF2 敲 除 效 率。 分 离 培 养 小 鼠 骨 髓 源 巨 噬 细 胞 ( bone marrow-derived macrophages,BMDMs),检测脂多糖( lipopolysaccharide,LPS) 诱导的炎症相关因子 mRNA 变化。 结果 建立了KLF2 flox / flox / Lyz2-Cre +基因型小鼠,即巨噬细胞特异性敲除 KLF2 基因。 小鼠骨髓、BMDMs 的 KLF2 mRNA 及蛋白水平显著低于对照组小鼠,而心脏、肝、肾组织中 KLF2 mRNA 表达较对照组小鼠无显著变化。 两组小鼠的体重、进食、进水、形态无显著性差异。 在 LPS 作用下,缺失 KLF2 的 BMDMs 炎症相关基因 IL-6 mRNA 表达水平较对照组显著下降,而 IL-1、iNOS、CD86 mRNA 表达水平较对照组显著升高。 结论 本研究成功构建了巨噬细胞特异性敲除 KLF2 小鼠模型,为进一步研究巨噬细胞 KLF2 对临床炎症相关疾病的调控作用及机制奠定基础。

    • 杨璐瑜,林安盈,杨正望,李岚,余曦明

      2024,32(4):451-460, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2024. 04. 005

      Abstract:

      目的 探讨健脾化痰方对多囊卵巢综合征合并胰岛素抵抗(PCOS-IR)大鼠脂代谢及叉头盒转录因子-1(FOXO1) / 丙酮酸脱氢酶激酶 4(PDK4)信号通路的影响。 方法 40 只雌性 SD 大鼠随机分为空白对照组 10只和造模组 30 只。 采用高脂饮食(8 周)联合来曲唑(第 4 ~ 8 周加入)建立 PCOS-IR 大鼠模型。 完成造模后,将造模组大鼠随机分为模型对照组、健脾化痰方组、二甲双胍组,药物干预 4 周。 观察各组一般情况,测定中医证候评分,计算体重变化;采用苏木素-伊红(HE)染色观察卵巢组织病理学改变;血液生化仪测定空腹血糖(FBG)和血脂四项;酶联免疫吸附(ELISA)法测定性激素如卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、睾酮(T)、雌激素(E2 )、胰岛素(FINS)水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法及实时荧光定量 PCR 法测定卵巢 FOXO1、PDK4 表达的变化。 结果 与空白对照组相比,模型对照组出现脾虚痰湿症状,体重明显增加,血清 LH、T、LH/ FSH 升高,E2、FSH 降低,卵巢多囊性改变明显,糖脂代谢调控失常(P< 0. 01)。 与模型对照组相比,健脾化痰方组与二甲双胍组大鼠体重增速放缓,卵泡发育情况见好,血清 LH、T、LH/ FSH、FBG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C 降低,E2、FSH 升高,卵巢FOXO1、PDK4 mRNA 及蛋白表达下调(P< 0. 05,P< 0. 01);可升高血清 HDL-C 含量,但是组间差别无统计学意义(P> 0. 05)。 结论 健脾化痰方能有效调节性激素分泌,改善 PCOS-IR 大鼠卵巢生殖功能,调节糖脂代谢,其机制可能是通过抑制 FOXO1 / PDK4 通路发挥作用。

    • 王晓仪,李苗,王琳霞,喻斌,华永庆

      2024,32(4):461-467, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2024. 04. 006

      Abstract:

      目的 建立棕榈酸诱导的斑马鱼脂毒性损伤骨形成抑制模型。 方法 将 AB 品系斑马鱼胚胎分为对照组、棕榈酸组(PA 组)和辛伐他汀组(SIM 组)。 从 3 dpf(days post fertilization,dpf)开始,PA 组、SIM 组给予 PA造模。 从 5 dpf 开始,SIM 组给予 SIM 连续给药 4 d。 9 dpf 通过钙黄绿素染色法、尼罗红染色法、甘油三酯及总胆固醇含量测定、q-PCR 判断模型是否成功建立。 结果 PA 显著减少斑马鱼椎骨骨节数目、促进脂质堆积、增加甘油三酯及总胆固醇含量、促进成脂相关基因 PPARγ、c / EBPα 的表达并抑制成骨相关基因 ALP、RUNX2 的表达。 SIM可以改善 PA 对斑马鱼的骨形成抑制效应。 结论 采用 PA 给药的方法可成功造成与骨质疏松症( osteoporosis,OP)病理过程相似的脂毒性损伤骨形成抑制模型,该方法简便、灵敏、可控,可用于 OP 及相关疾病的药物筛选。

    • 张晴,张曦文,何松,袁宝,陈健,任文陟,权福实,胡进平,丁瑜

      2024,32(4):468-476, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2024. 04. 007

      Abstract:

      目的 开发大林姬鼠多态性微卫星标记,丰富大林姬鼠遗传数据,为大林姬鼠遗传质量控制及基因定位等工作奠定基础。 方法 基于大林姬鼠基因组序列筛选微卫星位点,挖掘微卫星引物,通过多重 PCR 技术分析群体的遗传多样性。 结果 成功开发出 30 个微卫星标记,利用 60 份大林姬鼠基因组 DNA 对 30 个微卫星位点进行评价,共检测出 152 个等位基因,平均每个位点有 5. 067 个等位基因;平均观察杂合度为 0. 592;平均香农指数为 1. 265;平均多态信息含量为 0. 598。 结论 基于本研究所开发的微卫星位点具有较好的多态性,能有效分析大林姬鼠群体的遗传多样性,适合为建立大林姬鼠遗传质量标准和遗传质量检测方法奠定基础。

    • 赵梅玉,史欣悦,周姝伶,李海军,樊淑婷,熊印华

      2024,32(4):477-484, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2024. 04. 008

      Abstract:

      目的 利用代谢组学手段研究非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠血清的氨基酸和溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)代谢轮廓,寻找可表征 NAFLD 的生物标志物并推测其发生的可能机制。 方法 通过喂养高脂饮食饲料和腹腔注射 CCl4 制备 NAFLD 大鼠,采用液相色谱-质谱联用技术测定对照组和 NAFLD 组的大鼠血清中 15 种 LPCs 和 18 种氨基酸的含量;采用主成分分析和正交偏最小二乘法-判别分析等方法分析大鼠 NAFLD 肝损伤后血清中 LPC 和氨基酸代谢轮廓的变化,运用 Pearson 相关分析方法分析生物标志物与 NAFLD 的相关性。 结果 NAFLD 组的大鼠血清 LPC 和氨基酸代谢轮廓明显偏离对照组,且能完全区分开;LPC(20 ∶ 1)、精氨酸和谷氨酸对 NAFLD 有显著贡献,这 3 个代谢物被鉴定为生物标志物;LPC(20 ∶ 1)和精氨酸与 AST、ALT、LDL、TBIL 等血清生化指标显著相关。 结论 血清溶血磷脂酰胆碱和氨基酸的代谢轮廓与NAFLD 密切相关。

    • 简芹,向思睿,王楚楚,陈芜,付西,由凤鸣,郑川,林俊芝

      2024,32(4):485-492, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2024. 04. 009

      Abstract:

      目的 建立基于 Micro-CT 动态表征的 BALB/ c 小鼠肺腺瘤动物模型研究方法。 方法 取 80 只 SPF级雌性 BALB/ c 小鼠,随机分为 4 组:模型低剂量组(1 mg / g 乌拉坦腹腔注射 1 次)、模型中剂量组(1 mg / g 乌拉坦腹腔注射,每周 1 次,连续 2 周)、模型高剂量组(1 mg / g 乌拉坦腹腔注射,每周 1 次,连续 4 周)和空白组(等体积生理盐水腹腔注射)。 采用 Micro-CT 定期监测小鼠肺结节生长情况,Analyze 12. 0 分析系统绘制小鼠肺部 3D 图像,苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理学变化。 结果 与空白组相比,各模型组小鼠第 11 周时均观测到类圆形高密度影的肺结节。 结节形成率随造模周数增加而升高,至第 21 周时,模型高、中、低剂量组结节形成率分别为93. 8%、93. 8%、87. 5%;结节数分别以 2 ~ 4 个、1 个、1 ~ 2 个为主;低剂量组肺结节最大直径平均值高于中、高剂量组(P< 0. 05);肺结节体积三组之间差异无统计学意义。 HE 染色结果显示模型高、中、低剂量组病理类型均为肺腺瘤。 结论 模型各剂量组均成功诱导肺腺瘤,Micro-CT 可对小鼠肺结节生长情况进行表征,其中模型中剂量组结节形成率高,肺腺瘤数量适中,模型稳定,更适合小鼠肺腺瘤动物模型的研究。

    • 卢婉贤,马琦,王黎,刘梦迪,郭宝平

      2024,32(4):493-502, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2024. 04. 010

      Abstract:

      目的 建立肝特异性 Rbp4 基因敲除小鼠模型,并初步探索肝特异性 Rbp4 基因缺失对糖代谢的影响。 方法 利用 Cre-LoxP 技术,使用 C57 / BL6J 小鼠和 Alb-Cre 小鼠构建肝特异性 Rbp4 基因敲除小鼠模型。 利用PCR 及琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型。 选取 10 只 18 周龄 C57 / BL6J 雄性小鼠为野生对照组(WT),10 只同周龄flox 纯合且 Alb-Cre 阴性小鼠为实验对照组(Rbp4 flox / flox:Cre-),10 只同周龄 flox 纯合且 Alb-Cre 阳性小鼠为实验组(Rbp4 flox / flox:Cre +)。 分别利用 Western Blot 及 qRT-PCR 验证小鼠肝中 RBP4 蛋白及 Rbp4 mRNA 表达水平。 利用qRT-PCR 检测其他组织中 Rbp4 mRNA 表达水平。 采用苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织形态。 利用血糖仪检测小鼠尾静脉血液标本血糖值,进行葡萄糖耐量及胰岛素耐量实验。 利用 qRT-PCR 检测肝糖代谢基因磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(Pepck)和葡萄糖-6-磷酸酶(G6pase)表达水平。 结果 成功繁育并鉴定出肝特异性 Rbp4 基因敲除小鼠。 Rbp4 flox / flox:Cre +组小鼠肝中 RBP4 蛋白表达显著减少(P< 0. 05),Rbp4 mRNA 表达显著减少(P< 0. 05)。 三组小鼠脂肪、肾、胰、脾、心脏和肌肉组织中 Rbp4 mRNA 的相对表达量差异无显著性(P> 0. 05)。 HE 染色、葡萄糖耐量及胰岛素耐量实验结果表明肝特异性 Rbp4 基因敲除对肝组织形态、葡萄糖耐量及胰岛素耐量无显著影响(P>0. 05)。 三组小鼠肝中 Pepck mRNA 表达差异具有显著性(P< 0. 05),两两比较显示,Rbp4 flox / flox:Cre + 组小鼠肝中Pepck mRNA 相对表达量较 Rbp4 flox / flox :Cre-组小鼠降低(P< 0. 05)。 三组小鼠肝中 G6pase mRNA 表达差异无显著性(P> 0. 05)。 结论 成功构建了肝特异性 Rbp4 基因敲除小鼠模型,基因缺失可抑制小鼠肝 Pepck mRNA 表达,为进一步探索该基因在小鼠糖代谢中的作用提供依据。

    • 梁小乔,方朱雨冰,杨颖,何州烊,宁丽

      2024,32(4):503-512, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2024. 04. 011

      Abstract:

      目的 基于转录组学测序技术,观察肺纤维化进程中 GIMAP8 和 SEC14L5 在尘肺患者和矽肺小鼠模型中的表达变化,为阐明肺纤维化的发生和发展提供理论依据。 方法 将雄性 C57BL/ 6 小鼠随机分为 PBS 组(磷酸缓冲盐溶液)和 Silica 组(二氧化硅悬液),通过非暴露式气管插管方式在第 0、14 天向 Silica 组小鼠灌注 100mg / mL 二氧化硅悬液 50 μL,PBS 组灌注等量磷酸缓冲盐溶液。 第 28 天时评估小鼠肺功能并处死所有小鼠,进行肺组织形态观察、纤维化评价以及 mRNA 水平的检测。 结果 与健康对照者相比,尘肺患者筛选出有显著表达差异的 mRNA 共 584 种,其中 242 种 mRNA 显著上调,342 种 mRNA 显著下调。 富集分析显示,这些差异表达的mRNA 主要参与了 P53、NF-κB、TNF、AMPK 等信号通路。 PBS 组小鼠肺结构正常,而 Silica 组小鼠呈现肺泡结构破坏,胶原纤维沉积和纤维团块。 肺组织中 GIMAP8 表达上调,SEC14L5 表达下调。 Silica 组小鼠肺功能有所下降。 结论 在尘肺患者及矽肺小鼠模型中,GIMAP8 和 SEC14L5 可能参与肺纤维化的发生和发展,这可能为预防和治疗这些疾病提供分子理论基础。

    • 程齐,丁樱,徐闪闪,代彦林,韩姗姗,黄欣

      2024,32(4):513-522, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2024. 04. 012

      Abstract:

      目的 基于文献挖掘探讨紫癜性肾炎动物模型的造模特点,为制备规范化的紫癜性肾炎动物模型提供参考。 方法 通过计算机检索中国知网、万方、维普、中国生物医学文献数据库、PubMed 中英文数据库中相关研究文献,获取近 20 年紫癜性肾炎动物实验文献,将实验动物种类、造模方法、给药剂量、给药周期、成模标准及检测指标进行人工筛选,应用 Microsoft Excel 2021 软件建立数据库并进行统计分析,运用 SPSS Modeler 18. 0 对高频指标进行关联规则分析并运用 Cytoscape 3. 6. 1 软件对关联网络图进行可视化升级。 结果 归纳总结符合纳入标准的 106 篇文献,建立紫癜性肾炎动物模型多选用 SD 大鼠和 KM 小鼠,造模方式多选用药源性诱导,造模药物以牛血清白蛋白( bovine serum albumin,BSA) + 脂多糖( lipopolysaccharide,LPS) + 四氯化碳( carbon tetrachloride,CCl 4 ) + 蓖麻油、卵白蛋白(ovalbumin,OVA) + 弗氏完全佐剂、麦胶蛋白 + 印度墨水、牛血清白蛋白 + 葡萄糖菌肠毒素 B(staphylococcus enterotoxin B,SEB)复刻紫癜性肾炎吻合度较高的动物模型,周期一般在 5 ~ 14 周,成模标准多选用皮肤紫癜,尿红细胞数增多,尿蛋白阳性,肾组织可见肾小球系膜增生及以免疫球蛋白 A( immunoglobulin A,IgA)为主的免疫复合物沉积于小血管表示造模成功。 检测指标共涉及 36 个医学指标,其中肾及尿液相关的检测指标 23 个,血液相关检测指标 9 个,其中使用频率 ≥ 10%的有 24 h 尿蛋白定量、白细胞介素、肾病理、尿红细胞计数、IgA 及循环免疫复合物(circulation immune complex,CIC)、肌酐(creatinine,Cr)等 10 个指标,对高频指标进行聚类分析,结果表明多采用 24 h 尿蛋白定量-白细胞介素-肾病理-尿红细胞数-IgA 综合评价模型。 结论 现有的紫癜性肾炎动物实验多选用 SD 雄性大鼠和 KM 雌性小鼠,造模方式多采用药源性诱导,其中瘀热证复合 IgA 肾病法(病证结合法)具有重复性强、成模率高的优点,可为 HSPN 动物实验模型选择提供参考。

    • 林锟,何宪顺,田佳庆,陆舜,何敏聪,林天烨,何晓铭,范帅,杨宏光,于天启,张大光,何伟,魏秋实

      2024,32(4):523-529, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2024. 04. 013

      Abstract:

      血友病的反复出血并发血友病性关节炎(hemophilia arthritis,HA),严重影响患者生活,消耗大量社会医疗资源,受限于伦理要求,需要建立 HA 动物模型进行研究。 为了总结血友病性关节炎动物模型的研究进展,本文查阅近年国内外有关动物 HA 模型的研究文献,从物种选择、建模方法以及组织病理学、影像学评价方法等方面进行综述。 物种选择上包括啮齿类鼠类、新西兰兔、比格犬、小型猪、食蟹猴等;造模方法包括基因敲除创伤模型、基因敲除自发模型和注射模型,其中基因敲除自发模型最接近人类 HA 的自发出血并发关节炎的病理生理过程,更贴近人类 HA,但是由于造模成本高、表型不稳定、成活率低等因素,该模型并不作为动物实验研究的首选;相比之下,基因敲除创伤模型具有造模时间短、稳定性强、成功率高等特点,因此被广泛应用。 HA 模型的评价除了多种大体评分方法外,还包括 MRI、micro-CT、MSKUS / PD 等多种影像学方法可供选择。 通过对 HA 模型研究进展的综述,为研究其发病机制和疗效验证提供更多依据,弥补 HA 临床数据的匮乏,特别是中医药治疗方面。

    • 夏聪聪,刘浩乐,侯海雯,刘恩岐,赵四海

      2024,32(4):530-538, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2024. 04. 014

      Abstract:

      随着我国人口老龄化趋势加剧,腹主动脉瘤( abdominal aortic aneurysm,AAA)发病率逐渐升高。 由于动脉瘤破裂后死亡率极高,该病已经成为危害我国人群健康的重要疾病之一。 在组织病理学上,AAA 表现为中膜平滑肌细胞耗竭、弹力纤维断裂和退化、细胞外基质降解和血管局部炎症反应等。 目前,临床上 AAA 的治疗多以血管内介入治疗为主,缺乏药物治疗手段,这也与致病机制迄今未被完全阐明有关。 目前 AAA 动物模型主要以啮齿类实验动物(小鼠、大鼠)为主,也有部分中、大型实验动物(如兔、豚鼠、犬和猪等)。 在造模方法上,主要包含弹性蛋白酶动脉腔内灌注法、血管紧张素Ⅱ输注法、氯化钙涂抹法和血管组织移植法等。 部分药物或手术 AAA 模型由于前期诱导刺激的停止,诱导后动脉瘤病变趋于稳定。 开发允许 AAA 持续发展,甚至可以在人为刺激下诱导破裂的,更符合人动脉瘤发展规律的模型是今后的造模研究方向之一。 实验动物模型是阐明 AAA 发病机制、开发治疗动脉瘤新药和评价相关治疗策略安全性的重要研究工具。 因此,本文综述了目前常用的 AAA 造模方法和其在临床前转化研究中的应用。

    • 陈菁青,郑建华,董巧燕,张文盛,马连素,邱业峰

      2024,32(4):539-546, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2024. 04. 015

      Abstract:

      肠道是动物体内最大的免疫器官,也是机体主要的消化、吸收、代谢场所,维持肠道稳态健康是维护动物机体健康的重要保障。 研究表明应激易使肠屏障受损、通透性增加、肠道功能紊乱,引发肠道应激损伤。 色氨酸是哺乳动物的一种必需氨基酸,具有改变肠道菌群组成与代谢,提高肠道黏膜屏障的功能,在维持肠道稳态方面发挥着重要作用。 应激状态下大脑和肠道组织色氨酸及其代谢产物含量的异常,提示色氨酸可能在应激反应中具有重要作用。 因此,深入探究应激因素的致病机制,揭示色氨酸及其代谢产物对应激动物肠道功能紊乱的调节作用,可为肠道应激损伤提供安全便捷有效的营养防治措施。 本文主要就目前应激机制研究进展、肠道应激损伤与 色氨酸代谢对肠应激损伤调控作用的研究现状及最新研究进展进行综述。

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    2024年第32卷第4期
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    • 半乳糖凝集素3基因敲除对MRSA感染小鼠皮肤模型中脓肿发展及肥大细胞激活的影响

      王淑君, 张丁, 李一鸣, 张思怡, 周静, 陈紫涵, 程美琦, 韩珊珊, 王德成, 晁金

      Abstract:

      【摘要】目的:探讨半乳糖凝集素-3(Gal3)在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染小鼠皮肤模型中对皮肤脓肿发展以及肥大细胞(MC)激活的影响。方法:6-8周龄Gal3基因敲除(Gal3-/-)小鼠皮下接种MRSA,对照组注射PBS,每组5只。观察记录小鼠皮肤脓肿发展和病理学变化,比较皮肤组织中的载菌量,并分析相关炎性细胞因子、MC脱颗粒及活化标志物5-羟色胺的差异。结果:感染MRSA后,Gal3+/+小鼠皮肤出现渐进性脓肿,而Gal3-/-小鼠脓肿体积较小。与Gal3+/++MRSA组相比,Gal3-/-+MRSA组皮肤载菌量显著降低(P<0.01),且组织病理学观察显示较少的炎症细胞浸润。Gal3-/-小鼠皮肤中的细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-33、TGF-β和IL-10 均显著低于对照组小鼠(P<0.05)。甲苯胺蓝染色显示,WT+MRSA组皮肤组织中大量MC释放颗粒物质(P<0.01),而Gal3-/-+MRSA组仅发现少量脱颗粒的MC。免疫组化染色进一步发现,Gal3-/-+MRSA组中5-HT的表达显著低于WT+MRSA组。结论:Gal3缺失降低MRSA感染导致的小鼠皮肤中MC的活化与脱颗粒,改变炎症反应,减轻了皮肤组织的脓肿发生。

      • 1
    • 雪貂在抗感染药物非临床研究中的应用

      刘学武, 唐梓宁, 彭冬冬, 杜艳华, 姜德建

      Abstract:

      雪貂应用于抗感染药物评价的优势在于病原微生物(尤其是病毒株)能不经宿主适应直接进行感染和传播,且动物感染后的临床症状与人极为相似。虽然雪貂在抗病毒药物的研发中起到了极为重要的作用,但其应用范围仍有一定的局限性,可能与雪貂缺少相应的实验动物饲养和应用的国家级标准,缺乏特异性的诊断和检测试剂等因素有关。本文对雪貂作为感染疾病模型的特点进行总结,并汇总分析了雪貂在抗感染药物研究中的应用方向,旨在促进雪貂作为实验动物的进一步应用。

      • 1
    • 异鼠李素通过抑制LncRNA33782从而阻断NF-κB/Bcl-2/Bax信号通路缓解AKI肾小管细胞炎性凋亡

      贾建, 谭睿陟, 钟霞, 粟宏伟, 王丽

      Abstract:

      目的 探讨LncRNA-33782在AKI肾小管损伤中的功能以及异鼠李素改善AKI肾小管炎性细胞凋亡的作用机制。方法 将24只雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组,对照组、AKI模型组、电转染+AKI组、异鼠李素治疗组(30 mg/kg灌胃给与异鼠李素)。通过观察电转染敲低LncRNA-33782和异鼠李素治疗干预后小鼠肾功、病理结构改变、肾脏炎性因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)表达评价LncRNA-33782在AKI中的作用以及异鼠李素的治疗效果,最后,体外LncRNA-33782过表达回复实验探讨异鼠李素的治疗作用机制,NF-κB被作为介导炎症的关键信号通路,Bax、Bcl-2蛋白表达量以及流式凋亡检测结果被用于评价肾小管细胞凋亡发生情况。结果 电转染敲低LncRNA-33782后肾脏损伤及肾功异常明显改善,炎性因子表达量显著降低;异鼠李素治疗后的AKI小鼠肾脏损伤也明显减弱,LncRNA-33782表达量降低,NF-κB信号通路受到抑制,肾小管细胞凋亡减轻。体外过表达LncRNA-33782后,异鼠李素对AKI的治疗作用受到抑制。结论 LncRNA-33782 对AKI肾脏炎性反应起促进作用,异鼠李素能够通过抑制LncRNA-33782介导NF-κB活化导致的肾小管炎性细胞凋亡。

      • 1
    • 两种呼吸道感染途径建立豚鼠结核模型的比较

      李新雨, 李海凤, 王煜, 屈沛杰, 王俊飞, 占玲俊

      Abstract:

      目的:建立不同剂量的滴鼻和气溶胶感染途径的豚鼠结核模型,并进行对比分析,为标准化豚鼠呼吸道感染结核模型建立提供基础。方法:雌性哈氏豚鼠24 只,随机分为6组,每组4 只,气溶胶和滴鼻途径感染豚鼠均用两个剂量,均分为3个组(A/B/C组,D/E/F组)。结核菌(Mycobacteria tuberculosis, Mtb)感染豚鼠后观察其一般表现,第14天解剖,取肺、脾、肝组织,记录大体病变,用HE染色分析组织中结核肉芽肿病变,采用抗酸染色分析原位菌的分布和数量,菌分离培养分析脏器荷菌量。结果:4个感染组(B-C, E-F)豚鼠的肺、脾、肝均有肉眼可见的结核病灶及HE染色后可见结核肉芽肿病变。抗酸染色和荷菌量提示,B/C组(气溶胶)的菌主要分布在肺组织,少数分布在脾和肝,荷菌量为104~5 CFU/ml;E/F组(滴鼻)的菌在肺、脾、肝均有分布,荷菌量为104~5 CFU/ml。B-C,E-F组的病变和荷菌量,组间均无显著性差异,但B、C、F组内病理学及病原学指标的标准差较小。结论:两个剂量的气溶胶和滴鼻途径均能制备豚鼠急性结核模型,气溶胶500 CFU Mtb即可成功制备该模型,且模型均一性较好;滴鼻途径50 000 CFU Mtb也可制备更均一的豚鼠急性结核模型,然而气溶胶500 CFU比滴鼻感染50 000 CFU发展为较严重的急性结核模型。

      • 1
    • 双光子显微镜技术下胶质瘤-壁细胞荧光活体基因小鼠模型的建立及应用

      马铖延, 杨星九, 史旭东, 高苒

      Abstract:

      目的 建立双光子显微镜下可视化胶质瘤、壁细胞和血管的活体自发荧光的基因小鼠模型并进行评价。 方法 以PDGFRβ-Cre(+/-):Rosa26-tdTomato(+/-)基因工程小鼠为观察壁细胞和血管结构的载体,接种GL261-CFP小鼠胶质瘤细胞并对颅骨进行透明化,通过双光子显微镜动态跟踪观察胶质瘤增殖侵袭过程中血管与壁细胞的动态变化。 结果 通过基因鉴定证实PDGFRβ-Cre(+/-):Rosa26-tdTomato(+/-)基因工程小鼠成功繁育。对比C57BL/6小鼠,基因工程小鼠的形态外观和繁殖等无差异,组织HE切片分析显示脏器发育无异常。Tamoxifen诱导下基因工程小鼠的Cre重组酶活性至第7天作用完全。接种GL261-CFP后观察到胶质瘤增殖侵袭的动态过程及肿瘤内血管形态结构紊乱、壁细胞游离增多。 结论 成功构建了荧光可视化壁细胞的基因工程小鼠,分别利用异硫氰酸荧光素-葡聚糖标记血管和青色荧光标记肿瘤细胞,使用玻璃圆片与固定环替代小鼠颅骨,实现了活体状态下长期稳定地动态跟踪小鼠接种脑肿瘤后血管及血管支持细胞的形态结构变化,为研究脑胶质瘤提供了病理可视化的动物模型。

      • 1
    • Ifitm3敲除小鼠模型的建立及其对神经干细胞增殖和分化影响的研究

      王凯瑜, 雷雪裴, 黄艺滢, 石桂英, 乐涵薇, 王杰, 林羿凡, 汤家鸣, 白 琳

      Abstract:

      目的 建立干扰素诱导跨膜蛋白3基因(Ifitm3)敲除小鼠模型,探究Ifitm3对小鼠神经干细胞增殖和分化的影响。方法 利用CRISPR/Cas9技术,建立Ifitm3敲除小鼠模型,通过PCR、Western Blot对其进行鉴定;利用免疫组织化学、流式细胞术等方法分析Ifitm3敲除小鼠和野生型小鼠的表型差异。分离并培养小鼠成体神经干细胞,检测神经球数量和尺寸,并通过RT-qPCR、Western Blot、免疫荧光检测神经干细胞增殖和分化标记物。结果 成功建立Ifitm3基因全身敲除小鼠,Ifitm3敲除小鼠发育正常,组织病理学及免疫系统未见明显异常。体外实验显示Ifitm3敲除对小鼠神经干细胞的自我更新潜能产生影响,导致神经干细胞增殖能力下降,并且抑制神经干细胞向未成熟神经元和终末期星形胶质细胞分化。结论 利用CRISPR/Cas9技术构建Ifitm3敲除小鼠,分离并体外培养神经干细胞证明了Ifitm3缺乏对神经干细胞的自我更新和增殖、分化产生影响,对阐明IFITM3的生物学功能提供见解。

      • 1
    • MAOA在前列腺癌神经内分泌分化过程中的动态变化特征

      韩昊, 李惠, 张彩勤, 赵菊梅, 魏晓丽, 师长宏

      Abstract:

      目的 探索前列腺癌神经内分泌分化(neuroendocrine transdifferentiation,NED)进展中单胺氧化酶A(monoamine oxidase A,MAOA)和叉头框蛋白A1(forkhead box A1,FOXA1)的动态变化特征,为临床神经内分泌型前列腺癌(neuroendocrine prostate cancer,NEPC)的治疗提供新的策略。方法 通过恩杂鲁胺(enzalutamide,ENZ)长期持续诱导的方式建立NED的细胞模型和小鼠移植模型;采用Western blot和qPCR方法检测MAOA、FOXA1在NED中的动态表达;选用GEO数据库分析在多种NED模型中MAOA与FOXA1的动态变化趋势;构建前列腺癌细胞系小鼠移植模型,通过免疫组化分析体内模型中MAOA、FOXA1在NED中的动态表达;通过慢病毒转染干预MAOA,检测MAOA对FOXA1的调控作用。 结果 MAOA与FOXA1在NED过程中均呈现先升高后降低的动态变化特征;敲低前列腺癌细胞中MAOA可以导致FOXA1的表达降低,这可能是MAOA通过FOXA1在NED的不同阶段发挥不同作用。目的 建立前列腺癌的神经内分泌分化(neuroendocrine transdifferentiation,NED)细胞模型和动物模型,探讨单胺氧化酶A(monoamine oxidase A,MAOA)在NED过程中的作用和机制。 方法 选取人前列腺癌细胞系C4-2,通过恩杂鲁胺(enzalutamide,ENZ)长期诱导模拟NED过程;通过Real-time PCR和Western blot技术检测 NED 过程中MAOA和叉头框蛋白A1(forkhead box A1,FOXA1)的变化;建立前列腺癌异种移植模型,体内实验验证MAOA与FOXA1在NED过程中的变化。利用GEO数据库测序数据GSE8702和GSE59986进一步支撑MAOA与FOXA1的表达情况。 结果 ENZ可作为诱导NED细胞模型和体内模型的方法;在ENZ引起的NED过程中,MAOA和FOXA1的表达均呈现先升高后降低的动态变化;敲低前列腺癌细胞中MAOA可以导致FOXA1的表达降低,这可能是MAOA通过FOXA1在NED的不同阶段发挥不同作用。 结论 MAOA和FOXA1在NED过程中呈先升高后降低的趋势,MAOA的表达能影响FOXA1的水平,MAOA/FOXA1可能在NED过程中发挥动态调控的作用。

      • 1
    • 听源性癫痫动物模型研究进展

      翟文骥, 吴杰, 郑体花, 郑庆印

      Abstract:

      听源性癫痫(Audiogenic seizures, AGS)是由于强声刺激引起的癫痫,发作时伴全身性肌痉挛,其模型在研究癫痫发生机制、寻找致病基因及调控通道、筛选新的抗癫痫药物(antiepileptic drugs, AEDs)等方面具有重要意义。本文从发病特点、可能的发病机制及致病基因等方面总结了目前常见的AGS动物模型研究进展,以期为研发AEDs提供新的研究方向和靶点。

      • 1
    • 基于非稳态负荷评估衰老及左归丸干预衰老的效果

      贾雨欣, 邓晓红, 孙磊峰, 陈丹丹, 段晓红, 严诗楷, 黄建华

      Abstract:

      目的 采用非稳态负荷(allostatic load,AL)的理论与方法评估衰老以及左归丸的抗衰老作用。方法 自然衰老大鼠,分别在2、5、8、14、18、21月龄剪尾取血,其中18月龄时随机分为老年对照组、左归丸低剂量组和左归丸高剂量组。左归丸干预3个月后,各组大鼠断颈处死,取用血样以及肌肉、肝脏等组织样本。各月龄、各组大鼠血样用流式细胞术检测T淋巴细胞数量和凋亡率,并检测各血清生化指标,包括低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol , LDL-c)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol, HDL-c)、甘油三酯(triglycerides, TG)、总胆固醇(total cholesterol, tCHO)、游离脂肪酸(free fatty acids, FFA)、25羟维生素D(25 hydroxyvitamin D, 25-OH-D)、皮质酮(corticosterone, CORT)、C反应蛋白(c-reactive protein, CRP)、白细胞介素-6(interleukin 6, IL-6)。纳入LDL-c、tCHO、HDL-c、FFA、TG、CORT、IL-6、CRP、25-OH-D、CD3+ T淋巴细胞计数、CD3+ T淋巴细胞凋亡率共11项指标用于AL评分。结果 大鼠血清LDL-c、TG、tCHO、25-OHD、CRP、IL-6随增龄发生显著改变,但变化模式有所不同。CD3+ T淋巴细胞计数随增龄显著降低(P < 0.01),CD3+CD4+CD8+ T淋巴细胞凋亡率随增龄显著升高(P < 0.01)。左归丸干预后,老年大鼠血清CORT水平显著提高(P < 0.01)、CD8+ T淋巴细胞凋亡率显著降低(P < 0.05)。AL评分自5月龄开始升高,至18月龄到达峰值。结论 与单一指标比较,AL能更好表征衰老过程。左归丸可以提高衰老大鼠的应激反应能力,延缓其免疫衰老。

      • 1
    • 孕期恐应激对胎盘葡萄糖营养物转运体的影响

      宋琦, 杜志欣, 杨丽萍, 侯俊林, 赵佳佳, 吴永叶, 王耀辉, 李笑琳

      Abstract:

      目的:探讨孕期恐应激对胎盘葡萄糖营养物转运体(glucose transporter,GLUT)表达的影响,为孕期应激致胎损理论提供证据。方法 将20只Wistar孕鼠,随机分为对照组,模型组,每组10只。其中,模型组采取旁观电击法造模持续19天,对照组正常饲养。实验结束后记录胎产数量、胎盘与胎鼠重量,计算胎盘效率。透视电镜观察胎盘细胞形态学变化。生物信息学分析筛选孕期恐应激胎盘的差异基因,进行GSEA富集分析。蛋白质免疫印迹法(western blot)、实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)、免疫组化法检测葡萄糖转运蛋白1(glucosetransporter1,GLUT1)、葡萄糖转运蛋白3(GLUT3)、葡萄糖转运蛋白6(GLUT6)和葡萄糖转运蛋白7(GLUT7)表达水平。结果 与对照组相比,模型组胎产数量和胎盘效率显著降低;模型组胎盘微绒毛稀疏短少,线粒体及内质网肿胀;GSEA分析发现,模型组胎盘基因显著富集在细胞葡萄糖稳态;western blot、real-time PCR和免疫组化结果显示,模型组胎盘中GLUT1、GLUT6以及GLUT7表达均下降。结论 孕期恐应激暴露导致不良胎产结局,可能与胎盘中GLUT1、GLUT6、GLUT7 3种关键葡萄糖转运体降低有关。

      • 1
    • 斑马鱼模型在阿尔茨海默病研究中的应用研究进展

      满海硕, 陈红利, 何悦, 孙雅煊, 霍清, 戴雪伶

      Abstract:

      【】 阿尔茨海默病(Alzheimer"s disease, AD)是一种中枢神经系统退行性疾病,主要表现为认知功能障碍、言语丧失等,其发病与多种因素有关。近年来,斑马鱼因其在大脑结构与功能、神经传导及AD致病基因等方面与人具有高度同源性而受到广泛关注。本文就斑马鱼作为动物模型探索AD发病机制、进行AD药物筛选、药物评估等方面的优势展开综述,以期为AD的发病机制及新药开发研究提供新思路。

      • 1
    • 肠纤维化动物模型研究进展

      王玺, 孙心, 邹得方, 顾任钧

      Abstract:

      肠纤维化(intestinal fibrosis,IF)是炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)的并发症之一,其难愈性和复发性给患者带来了严重的负担。目前该发病机制尚不明确,且尚无有效治疗方法,故造模研究备受关注,但现缺乏公认模型。本文就国内外肠纤维化的动物模型的建立方法、模型的适用范围、关键特征和模型的优缺点,从造模周期和造模方式两个维度做一综述。

      • 1
    • Micro-CT在实验动物疾病模型中的应用

      李淑桢, 戴文敬, 喻青青, 田苗, 张潜, 李蓓

      Abstract:

      Micro-CT作为一种无创性技术手段,在动物实验中应用广泛,可用于辅助检测多种动物疾病模型,包括骨骼疾病、肺部疾病、口腔疾病、代谢性疾病、中耳及内耳疾病以及肿瘤等,它能够提供多样性、科学性和可靠性的影像数据,因此已经成为动物实验中必不可少的实验工具之一。本综述将深入介绍Micro-CT的成像原理、梳理其在动物疾病模型研究中的应用,并总结了Micro-CT技术上的局限性,以及对未来的前景进行展望。

      • 1
    • 部分胆管结扎致胆汁淤积小鼠模型的构建方法学研究

      屠海烨, 包方奇, 张利棕, 蒋琛, 温思思, 赵梓宇, 方明笋, 陈民利

      Abstract:

      【摘要】目的 观察不同结扎位点和禁食方法对部分胆管结扎(pBDL)致胆汁淤积C57BL/6J小鼠模型的影响,研究成模率高、症状典型、稳定性好的pBDL造模方法。方法 分别采用左胆管结扎法(L-pBDL)和左侧与正中胆管汇合处结扎法(ML-pBDL)进行造模,观察不同pBDL结扎法对C57BL/6J小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)、总胆汁酸(TBA)和肝脏组织病理学的影响;并通过术前分别禁食12 h和16 h、术后均禁食禁水4 h,观察不同禁食方法对ML-pBDL模型体症和肝损伤的影响。结果 (1)ML-pBDL组黄疸出现率52.94%、术后3周内存活率64.71%,而L-pBDL组黄疸出现率11.76%、术后3周内存活率82.35%;与假手术组比较,L-pBDL组和ML-pBDL组血清肝功能指标均显著升高(P<0.01),且ML-pBDL组ALP活性明显高于L-pBDL组(P<0.05);相对于L-pBDL组,ML-pBDL组术后3周的肝脏纤维化更严重(P<0.01)。(2)禁食16 h组黄疸出现率93.33%、术后3周内存活率73.77%,而禁食12 h组黄疸出现率42.86%、术后3周内存活率71.42%;与假手术组比较,禁食16 h组和禁食12 h组ALP活性、ALT/AST比值、TBA水平与胶原纤维面积占比均显著升高(P<0.05)。禁食16 h组各观察指标均高于禁食12h组,但无明显差异(P>0.05),禁食12 h、16 h组均出现明显的胆管增生与肝脏纤维化(P<0.01),且禁食16 h组纤维化更严重(P<0.01)。结论 L-pBDL、ML-pBDL结扎法均可建立小鼠胆汁淤积模型,但L-pBDL模型症状仅表现为一过性的损伤特征,而ML-pBDL模型的肝脏病变典型、症状稳定,且适当延长术前禁食时间可提高ML-pBDL模型的成模率和稳定性,且病理症状更典型。

      • 1
    • 骨质疏松病证结合动物模型的研究进展

      李勇进, 章晓云, 曾浩

      Abstract:

      随着老龄化的加剧,骨质疏松症(osteoporosis,OP)的发病率逐年升高,已成为全球公共卫生问题之一。其主要特征为骨量降低及骨微结构破坏,临床上常表现为疼痛、驼背、身高降低,甚至出现骨折。目前临床上的治疗方式主要以西医为主,但存在诸多弊端,而中医药在防治OP过程中具有价廉,毒副作用小等优势。动物模型构建作为中医药基础研究过程中的重要手段,在医学发展过程中发挥着非常重要的作用,而病证结合动物模型已经成为我国中医药现代化研究发展不可或缺的方法之一。本文旨对目前病证结合OP动物模型的研究现状出发,总结模型构建及评价方法,以期为病证结合OP动物模型的研究提供一定的思路及参考。

      • 1
    • DMD模型鼠mdx小鼠线粒体损伤的研究进展

      高天

      Abstract:

      【摘要】Duchenne型肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy, DMD)是一种由编码抗肌萎缩蛋白的Dystrophin基因突变导致的致死性、进行性、X连锁隐性遗传肌肉疾病。目前,DMD尚无治愈手段,临床研究进展缓慢,动物模型的建立对DMD的实验研究作用越来越重要。结合研究发现,mdx小鼠具有DMD患者相同的发病机制,广泛应用于DMD病理机制和新药开发的研究中。线粒体损伤是DMD重要的病理机制之一,对线粒体的保护是DMD的潜在治疗靶点,因此探讨mdx小鼠与线粒体损伤的关系具有重要意义。本文就近年来DMD模型鼠mdx小鼠线粒体损伤的研究进展进行综述,为相关实验提供参考。

      • 1
    • 猴结核病的流行与防控

      翟伟, 刘栋辉, 徐正中, 郑成坤, 焦新安, 陈祥

      Abstract:

      非人灵长类(Non-human primates,NHPs)是结核病的易感宿主,感染后,结核不仅会在种群中相互传播,也会传播给人类。目前尚无有效的疫苗预防NHPs结核。虽然目前的防控方案已经较为成熟,减少了圈养NHPs结核病的发病率,但疫情仍有发生。本文总结了世界范围圈养和野生环境下猴结核病的流行病学状况,对当前常用检测方法的优缺点进行分析,并总结当前NHPs的防控检测最常见做法,以提高NHPs饲养工作者、管理者对结核病的认知,为完善当前管理程序提供依据,以期为我国猴结核病的诊断防控提供参考。

      • 1
    • 围绝经期综合征肾阴虚证大鼠汗液分泌及其生化指标的变化

      王婕, 陈雯佳, 林文武, 王颖峥, 王英豪, 黄美霞

      Abstract:

      目的 评估围绝经期综合征肾阴虚证“病证结合”模型大鼠的汗液分泌情况,并探讨其生化指标的变化。方法 将18只SD雌性大鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性药组,每组6只。空白对照组行假手术,模型组和阳性药组大鼠行双侧去卵巢手术,术后第7天给予L-甲状腺素(92 mg·kg-1)每日1次,连续给药7天建立围绝经期综合征肾阴虚证“病证结合”模型。阳性药组每日灌胃清骨散汤剂(7.3 g·kg-1),假手术组和模型组灌胃等量蒸馏水,每日1次,共14天。采用和田-高垣试剂着色法测定大鼠足跖部汗液分泌。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清cAMP、cGMP、LH、 GnRH、E2水平。蛋白免疫印迹法(Western blot)法测定大鼠足趾肉垫组织的M3受体、β2受体、水通道蛋白5(Aquaporin,AQP5)表达水平。 结果 (1)与假手术组比,模型大鼠体温升高,双耳发红,易激惹、毛发干枯等阴虚证的典型行为学表现,模型组大鼠汗液分泌显著增多;(2)模型大鼠血清cAMP水平显著升高, cGMP水平显著降低,cAMP/cGMP比值显著升高,LH、GnRH水平显著升高,E2水平显著降低。(3)大鼠足趾组织的M3受体表达下调,β2受体、AQP5表达水平上调。阳性药治疗2周后,血清cAMP水平显著下降, cAMP/cGMP比值显著降低,LH、GnRH水平降低,但不影响血清E2水平。大鼠足趾组织的M3受体上调,β2受体、AQP5表达水平下调。 结论 去势联合甲状腺素建立的围绝经期综合征肾阴虚证“病证结合”模型大鼠汗液分泌显著增多,其机制可能与cGMP、cAMP及其在汗腺上调控汗液分泌的关键蛋白M3R,β2AR,AQP5的变化有关。

      • 1
    • 心肌纤维化特殊染色方法比较与优化

      王亚恒, 马嘉昕, 雷雨, 张连峰, 吕丹

      Abstract:

      目的 心肌组织病理学检测是心肌纤维化诊断的金标准,而特殊染色是病理学检查中常用的检测手段,然而目前心肌纤维常用特染方法在软件分析中,存在胶原位置难辨识及定量分析误差大等问题,探讨最佳的特染方法对心肌纤维化诊断具有重要的临床意义。方法 利用实验室前期构建的心肌组织特异性cTnT R141W基因突变致扩张型心肌病转基因小鼠模型,制备心脏组织石蜡切片,分别进行马松三色染色法(Masson's trichrome staining,Masson)、天狼星红染色法(Picric Sirius red,PSR)、天狼星红-品红染色法(van Gieson staining,VG)、天狼星红-固绿染色法(Sirius Red/Fast Green staining,SR/FG)染色,利用Image J软件对胶原纤维面积进行定量比较。并从染液浓度、染色时间、酸性溶液预染三个方面对天狼星红-固绿染色法进行优化,对后续的胶原纤维定量分析进行应用验证。结果 四种特染方法均可实现胶原纤维的分布观察,其中,优化后的天狼星红-固绿染色法,即0.1%天狼星红-苦味酸酸性溶液预染5min,随后于0.1%天狼星红-苦味酸与0.04%固绿的混合液中染色1h,在软件识别中具有更低的漏读率和遗失率。结论 本文优化后的天狼星红-固绿染色法较其他几种传统胶原纤维特染方法,胶原纤维与心肌组织着色鲜亮,颜色对比明显,稳定性佳,方便快捷,更适用于后续胶原纤维占比定量分析应用。

      • 1
    • 树鼩角膜基质永生化细胞系的构建及其在病毒感染性方面的研究

      丁相荣#, 陈柳、#, 霍姝汭, 杞梦迪, 刘欣, 王文广, 李娜, 代解杰, 陆彩霞

      Abstract:

      目的 建立树鼩角膜基质细胞(corneal stromal cells, CSCs)永生化细胞系,并探讨其在病毒感染中的应用。方法 利用组织块贴壁培养法分离培养树鼩原代CSCs,将携带SV40T基因的慢病毒转染细胞后,再挑取单克隆进行传代培养,传至50代以上进行形态学观察、波形蛋白(vimentin)和永生化基因SV40T免疫荧光鉴定、核型鉴定、细胞增殖曲线测定。采用单纯疱疹病毒Ⅰ型(Herpes simplex virus-1,HSV-1)、ZIKV(GZ01株)、登革病毒Ⅱ型以及H1N1 A/Puerto Rico/8/1934(A/PR/8)在该细胞上进行病毒感染实验。结果 传至50代以上的树鼩永生化的CSCs呈梭形,细胞形态结构较好。波形蛋白(vimentin)和SV40T基因免疫荧光表达阳性。增殖曲线结果显示:细胞生长旺盛,第4-5天时处于对数生长期。原代细胞核型的染色体数稳定为62条,而永生化细胞第21代、第56代突变为64条且保持稳定。病毒感染实验显示:树鼩永生化的CSCs对HSV-1、ZIKV(GZ01株)、登革病毒Ⅱ型以及H1N1 A/Puerto Rico/8/1934(A/PR/8)病毒敏感,产生较高感染滴度,分别为1.32×105TCID50/mL、5.62×106TCID50/mL、2.69×107TCID50/mL、7.76×104TCID50/mL。结论 成功建立了树鼩CSCs永生化细胞系,提示该细胞系可用于单纯疱疹病毒、寨卡病毒、登革病毒和甲型流感病毒感染眼角膜疾病的作用机制及抗病毒药物的研究。

      • 1
    • 遗传多样性高血压小鼠模型的建立与基因转录调控分析

      黄智滨, 潘吉荣, 张伶燕, 赵大路, 王谦, 魏承志, 马旭, 白琳, 秦川

      Abstract:

      目的 探讨13个品系的遗传多样性高血压小鼠的血压表型差异、肾脏病理变化以及相关致病通路。方法 将13个品系的遗传多样性小鼠分别与Cckbr-/-小鼠进行杂交,得到不同遗传背景的Cckbr+/+Cckbr+/-Cckbr-/-三种基因型的小鼠。利用BP-2000无创血压分析系统测量小鼠血压,利用Western blot检测小鼠肾脏CCKBR蛋白表达变化,利用HE染色、免疫组化(IHC)检测小鼠肾脏组织病理学变化,利用转录组测序(RNA-Seq)分析筛选原发性高血压致病相关通路。结果 3个特定小鼠品系(A/J、LOT、FIM)中,收缩压(SBP)Cckbr-/-较Cckbr+/+有显著差异(P<0.05)。HE染色及免疫组化发现高血压对小鼠造成了一定程度的肾损伤。通过GO与Pathway富集分析发现差异表达基因富集在新陈代谢与昼夜节律调节等方面。结论 遗传多样性小鼠可以更好地模拟人群的遗传背景,为研究原发性高血压相关致病基因提供了新的资源。

      • 1
    • 非肥胖型多囊卵巢综合征大鼠模型的建立及评价研究

      乔诗清, 王停, 闫永煌, 杨九思, 余钰玲, 王砚敏, 孙亚腾, 吴宇杰, 朱佩轩, 李敏, 陈聪, 苏泽琦, 张偲

      Abstract:

      目的 建立符合临床特征的、稳定的非肥胖型多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome, PCOS)大鼠模型。方法 采用脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone, DHEA)皮下注射法建立PCOS大鼠模型。将3周龄SD大鼠分为正常组、6 mg/kg DHEA造模组、60 mg/kg DHEA造模组,造模组每日按照相应剂量进行DHEA皮下注射,正常组每日给予甘油皮下注射,连续21 d ,以卵巢组织病理学为金标准进行模型评价,明确DHEA致PCOS大鼠模型的最佳造模剂量。在此基础上,选取DHEA最佳造模剂量,分别设立停止造模组和继续造模组,进行28 d的模型观察,考察模型维持情况,其中停止造模组不再继续给予DHEA,继续造模模型组每48 h给予60 mg/kg DHEA皮下注射。评价指标包含大鼠体质量、动情周期、空腹血糖和血清胰岛素、卵巢组织病理形态和血清性激素水平。结果 1)与正常组相比,6 mg/kg DHEA造模组与60 mg/kg DHEA造模组体质量均未表现出明显差异,但二者动情周期均失去规律性,卵巢组织中可见较多囊状扩张的大卵泡,少见成熟卵泡,颗粒细胞层数减少且排列稀疏无序,黄体数量减少;且60 mg/kg DHEA造模组血清T、E2水平显著升高(P<0.05)。2)停止造模组:模型组与正常组相比,两周后恢复规律的动情周期,卵巢组织中可见各级生长卵泡和黄体,囊性卵泡减少,颗粒细胞层数增加,可见成熟卵泡,卵母细胞局部形态完整,且E2、AMH水平降低(P<0.05)。3)继续造模组:模型组与正常组相比,长期处于动情后期,卵巢组织中可见较多囊状扩张的大卵泡,少见成熟卵泡,颗粒细胞层数减少且排列稀疏无序,黄体数量明显减少,且血清LH、LH/FSH、T水平升高(P<0.05)。结论 连续21 d皮下注射60 mg/kg DHEA,能够成功构建符合临床特征的非肥胖型PCOS大鼠模型,在此基础上每48 h给予60 mg/kg DHEA 皮下注射能够保持模型的稳定性。

      • 1
    • 川芎挥发油治疗心绞痛的网络药理学研究及实验验证

      杨明, 王朝平, 雷志强, 刘波, 张华, 罗晶

      Abstract:

      目的 基于网络药理学研究川芎挥发油抗心绞痛的作用机制,并动物实验验证。方法 通过水蒸气蒸馏法、GC-MS、ADME参数共筛出挥发油成分;使用Pubchem、SwissTarget、DisGeNET、DrugBank数据库和R语言分别获取挥发油成分的靶点、心绞痛的靶点和交集靶点;蛋白质-蛋白质相互作用通过String数据库完成;使用R语言的clusterProfiler包对交集靶点进行GO和KEGG富集分析,并通过Cytoscape构建中药-成分-靶点-通路网络;借助AutoDock vina v1.2.3、Pymol、Discovery Studio 2016软件进行分子对接,分析关键靶点和主要挥发油成分的亲和力。最后,通过动物实验进一步验证川芎挥发油对心绞痛的治疗作用。结果 实验共得到10个挥发油成分和22个关键靶点,这些靶点与神经递质、突触膜上的受体、物质代谢等生物过程以及神经活性配体-受体相互作用、视黄醇代谢、药物代谢-细胞色素P450等通路密切相关;分子对接结果表明3-butylidenephthalide、Alpha-selinene、Trans-ligustilide等挥发油成分与多个关键靶点结合发挥治疗作用。动物实验说明川芎挥发油通过调节EF、FS、SV、LVIDs水平以及LDH、CK、AST活性,促进受损心肌细胞中ADRA1A、CHRM5蛋白的表达;改善心肌纤维状态,减小细胞间隙,减少炎性细胞浸润表现出保护心肌的作用。结论 综上所述,川芎挥发油有效保护受损心肌组织,发挥治疗心绞痛的作用。

      • 1
    • 四氯化碳诱导C57BL/6J小鼠肝纤维化模型建立方法及优化

      孙竞然, 卢秉久, 郑佳连, 孙晓宁, 徐俊超

      Abstract:

      目的 通过不同给药方式不同剂量四氯化碳诱导的C57BL/6J小鼠肝纤维化模型,通过影像学、分子生物学及组织病理学等方法进行比较,以此优化四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化模型。方法 36只健康C57BL/6J雄性小鼠,适应性饲养1周后,随机分为空白组、2周组、3周组、4周组、6周组及8周组共6组(n=6)。空白组以橄榄油0.2 mL腹腔注射,每周3次,各阳性对照组以以20% CCl4-橄榄油溶液0.2 mL腹腔注射,每周3次。记录各组小鼠体重变化情况。分别于第15天、22天、29天、43天及57天测量小鼠肝脏弹性值后取血,分别测量小鼠谷丙转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、前Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)及Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)含量,对肝组织进行HE、Masson及天狼星红染色,Metavir评分系统评估肝纤维化程度。结果 与空白组相比,各阳性对照组小鼠精神萎靡,扎堆喜卧。在小鼠体质量方面,4周组、6周组、8周组与空白组相比均明显下降,而2周组与空白组相比体明显升高。肝脏弹性超声显示,随给药时间增加,弹性值呈进行性升高。生化结果显示,与空白组相比较,各阳性对照组ALT、AST水平均显著升高,随给药时间增加,各阳性对照组HA、LN、PC-Ⅲ及Ⅳ-C水平呈升高趋势。病理结果显示,随着给药时间增加,小鼠肝脏纤维化程度呈进行性加重,4周时符合肝纤维化病理诊断,6周时有假小叶形成趋势,而8周时已形成假小叶,提示早期肝硬化。结论 20%CCl4-橄榄油溶液以每周三次、连续4周腹腔注射的方法能成功建立C57BL/6J小鼠肝纤维化模型,稳定性好、成模较快,可以作为肝纤维化模型制造的优化方案。

      • 1
    • 基于TLR4/Myd88/NF-κB信号通路探讨宣肺解毒方对多重耐药铜绿假单胞菌肺炎的作用机制

      沈婷婷, 李亚, 李素云, 李高峰, 韩冰洋

      Abstract:

      【摘要】目的 探究宣肺解毒方对多重耐药铜绿假单胞菌肺炎的作用机制。方法 除空白对照组(Control group)外,其余组采用气管插管的方法建立MDR-PA(9×108 CFU/ML,0. 5 mL)肺炎大鼠模型,造模成功后随机分为模型组(Model group)、宣肺解毒方低剂量组(XFJDF-low dose group)、宣肺解毒方中剂量组(XFJDF-medium dose group)、宣肺解毒方高剂量组(XFJDF-high dose group)以及亚胺培南西司他丁组(IPM group),每组12只;造模1天后,宣肺解毒方低、中、高剂量组分别给予1.725g/kg/d、3.45g/kg/d、6.9g/kg/d的XFJDF灌胃,亚胺培南西司他丁组给予410 mg/kg/d的IPM腹腔注射,空白对照组和模型组给予生理盐水灌胃,2次/天,持续7天。观察大鼠的状态变化、体重变化、肺组织湿干重比(W/D),采用苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-Eosin staining,HE)于光镜下观察各组大鼠肺组织病理学改变,采用酶免疫吸附测定法(ELISA)检测各组大鼠血清中白介素-1β(interleukin-1,IL-1β)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)炎症因子水平,采用比色法检测大鼠血清中还原型谷胱甘肽(GSH)含量与髓过氧化物酶(MPO)活性,采用TBA法检测大鼠血清中丙二醛(MDA)含量;采用免疫组化法(IHC)对肺组织中TLR4、Myd88、NF-κBp65蛋白进行定位与半定量观察,采用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组大鼠肺组织中TLR4、Myd88、NF-κBp65 mRNA和蛋白表达水平。结果 与Control group相比,Model组大鼠反应迟缓,呼吸频率加快、呼吸杂音增多且出现不同程度的寒颤,饮食饮水减少,体重下降;肺组织W/D(P < 0.01)显著升高,肺组织的肺泡腔以及肺支气管周围存有大量炎性细胞浸润,部分肺泡壁出现断裂融合形成气腔并伴有炎性渗出,肺间质增厚,局部可见肺纤维形成等;血清中IL-1β、TNF-α、TGF-β水平明显升高(P< 0.01),MDA含量增加、MPO活性增强、GSH含量降低(P< 0.01),肺组织中TLR4、Myd88、NF-κBp65 mRNA和蛋白表达显著升高(P< 0.01)。与Model组相比,干预组治疗组均可改善MDR-PA大鼠的一般状态,大鼠精神状态明显好转,反应灵敏度增强,体重增加,肺W/D降低(P < 0.01),肺组织病理损伤明显改善,血清中TNF-α、TGF-β、MDA水平显著降低、GSH水平升高(P< 0.01);除XFJDF低剂量组外,血清中IL-1β水平与MPO活性明显降低(P< 0.01);肺组织中TLR4、Myd88、NF-κBp65 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P< 0.01,P < 0. 05),以XFJDF高剂量组以及IPM组最为显著。 结论 宣肺解毒方能够显著改善MDR-PA大鼠的一般状态、体重、肺组织W/D以及肺组织病理,降低炎症与氧化应激反应,其作用机制可能与宣肺解毒方抑制肺组织中TLR4/Myd88/NF-κB通路表达有关。

      • 1
    • 愤怒动物模型神经机制研究进展

      张春鹏, 颜嘉宏, 张永华

      Abstract:

      愤怒这一负面情绪会对人体产生诸多影响。与愤怒情绪产生有关的脑部区域主要与中央灰质、杏仁核、下丘脑有关。动物模型是了解疾病和机制的重要手段,近些年关于愤怒动物模型的研究逐渐增多,愤怒机制的研究也不断深入。关于愤怒模型的研究大部分集中在中缝背核、下丘脑和海马区域,相关的神经递质研究主要与GABA的表达和单胺类神经递质含量相关。本文旨在通过检索愤怒有关的动物模型,总结愤怒发生的脑内神经机制,希望为愤怒情绪的研究提供有益的参考。

      • 1
    • 基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡通路探索小鼠急性肺损伤动态时间模型的建立

      樊懿萱, 杨志旭

      Abstract:

      目的:基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡通路,建立随时间变化的脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠模型,观察不同时间点小鼠肺损伤情况,根据不同时间伤情的变化和焦亡通路相关蛋白的表达,综合筛选出最佳造模时间点,为后续实验奠定动物模型基础。方法:54只6-8周龄SPF级雄性BAL b/c小鼠,随机分为9组,空白对照组和造模时间组(1、3、6、12、18、24、48和72 h组),分别检测体重、肺组织大体、病理观察及半定量评分、肺指数、肺含水量及湿干重比;取肺泡灌洗液检测白细胞计数,TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18及BCA蛋白浓度;使用免疫印迹法检测肺组织中经典焦亡通路相关NLRP3、pro-Caspase-1、Caspase-1、GSDMD蛋白的表达。结果:根据体重统计,各组体重均有下降,24h及48h组体重下降最为明显;通过肺组织大体、病理观察及评分发现,24h-72h肺组织损伤严重,每组与Con组比较均有统计学意义;肺指数、肺含水量及湿干重比在24-72h明显升高;肺泡灌洗液中白细胞从造模后6h开始升高,48h可达峰值,至72h均维持上升状态;灌洗液中IL-18在24h开始升高,72h仍然保持持续升高趋势;TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子在6h时均保持最高水平状态,在48h明显降低;灌洗液中蛋白浓度在24h、48h及72h与Con组相比均有明显升高;通过免疫印迹法检测发现,ALI模型各个时间组焦亡通路蛋白NLRP3、pro-Caspase-1、Caspase-1与GSDMD蛋白表达均有上调,24 h-72h组的通路蛋白表达与对照组相比明显增强。结论:综合分析不同时间组中各项实验指标、炎症因子及WB中通路蛋白的表达,发现焦亡机制与ALI的发生与进展密切相关,并随时间迁移,从实验结果得知24h-48h肺损伤程度严重,肺损伤相关指标及通路蛋白具有研究意义,可作为造模时间参考,也为后续研究ALI的具体机制及干预靶点提供了模型参考与实验基础。

      • 1
    • 虫草菌丝调节AMPK/SirT1信号通路对四氯化碳诱导肝纤维化小鼠的作用

      杨钊, 闫阮玉, 吴洪雨, 黄恺, 沈丽, 陶艳艳, 刘成海, 彭渊

      Abstract:

      【摘要】 目的 研究虫草菌丝(CMCS)对四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化模型小鼠肝脏腺苷酸活化蛋白激酶/沉默信息调节因子1(AMPK/SirT1)信号通路的作用机制。方 法 将C57BL/6小鼠(n=40)按体重分层随机分为5组:正常对照组、CMCS对照组(3.0 g/kg/d)、模型对照组、CMCS 1.5g/kg组(1.5 g/kg/d)和CMCS 3.0g/kg组(3.0 g/kg/d),采用腹腔注射10%CCl4(2ml/kg)诱导小鼠肝损伤模型。造模与给药2周后,检测血清ALT、AST、TBil水平;HE染色观察肝脏炎症;天狼星红染色观察肝脏胶原沉积;Jamall's法检测肝脏羟脯氨酸(Hyp)含量;流式蛋白定量技术(CBA)检测肝组织IL-6、MCP-1、IFN-γ、TNF、IL-10、IL-12p70水平;免疫组化观察肝组织Collagen I和SirT1表达情况; RT-qPCR检测肝组织Prkaa1、Prkaa2、Lkb1和p53水平。结果 CCl4染毒2周后,模型对照组血清ALT、AST、TBil水平均明显升高(P<0.05);HE和天狼猩红染色分别提示肝内大量炎症细胞浸润和胶原沉积;肝脏Hyp含量及IL-6、MCP-1、TNF表达明显增多(P<0.05),IL-10和IL-12p70表达明显减少(P<0.05);免疫组化染色提示肝组织Collagen I表达增多;SirT1在肝窦间隙表达减少,在胶原沉积出表达增多;RT-qPCR检测提示肝组织Prkaa1、Prkaa2、Lkb1表达下降, p53表达增多(P<0.05)。CMCS可显著降低纤维化小鼠血清ALT、AST水平;降低肝组织IL-6、MCP-1、TNF表达(P<0.05),上调IL-10、IL-12p70水平(P<0.05);减少肝脏炎细胞浸润、胶原形成和Hyp含量,促进肝窦内SirT1表达,上调肝脏Prkaa1、Prkaa2、Lkb1表达(P<0.05);减轻肝内Collagen I、p53表达(P<0.05)。与CMCS 1.5g/kg组相比,CMCS 3.0g/kg组抑制肝脏炎症、胶原沉积及上调AMPK/SirT1表达更为明显(P<0.05)。结论 CMCS可通过上调AMPK/SirT1信号通路而发挥抗CCl4诱导小鼠肝纤维化的作用。

      • 1
    • 棕榈酸诱导斑马鱼脂毒性损伤骨形成抑制模型的建立

      王晓仪, 李苗, 王琳霞, 喻斌, 华永庆

      Abstract:

      目的 建立棕榈酸诱导的斑马鱼脂毒性损伤骨形成抑制模型。方法 将AB品系斑马鱼胚胎分为空白对照组(Control组)、棕榈酸组(PA组)和辛伐他汀组(SIM组)。从3 dpf(days post fertilization,dpf)开始,PA组、SIM组给予PA造模。从5 dpf开始,SIM组给予SIM连续给药4天。第9 dpf通过钙黄绿素染色法、尼罗红染色法、甘油三酯及总胆固醇含量测定、q-PCR判断模型是否成功建立。结果 PA显著减少斑马鱼椎骨骨节数目、促进脂质堆积、增加甘油三酯及总胆固醇含量、促进成脂相关基因PPARγ、c/EBPα的表达并抑制成骨相关基因ALP、RUNX2的表达。SIM可以改善PA对斑马鱼的骨形成抑制效应。结论 采用 PA给药的方法可成功造成与OP病理过程相似的脂毒性损伤骨形成抑制模型,该方法简便、灵敏、可控,可用于OP及相关疾病的药物筛选。

      • 1
    • 透视引导下犬椎体成形术穿刺模型建立和评价

      王浩田, 刘佳, 黄健, 齐军强, 许国华

      Abstract:

      目的:通过对犬脊柱解剖形态的测量及分析,建立透视下犬椎体成形术穿刺模型,并通过术后影像学分析,评估该模型建立方法的有效性和安全性。方法:测量6只12月龄左右犬腰椎标本形态及其参数:L1~L7椎体高度、椎体基底宽度、椎间盘上缘距椎体最狭部距离、脊椎乳突垂直线距椎间盘上缘距离、横突中点与椎间盘下缘垂直距离,以明确犬椎体解剖特点,确定骨水泥注射的最佳位置、注射方向以及注射深度后,对6只健康比格犬(体重20—25kg)L4、L5、L6椎体建立椎体成形术用穿刺模型。术后4周处死后行影像学检查,主要观测指标包括:手术时间,术后植入骨水泥分布,椎管及椎体前缘完整性。结果:通过犬解剖观测,椎体高度从L1~L5逐渐增大,从L5~L7逐渐减小,椎体基底部宽度从L1~L7逐渐增大。脊椎乳突垂直线距椎间盘上缘距离呈L1~L7逐渐增加趋势(1.9~4.0mm)。横突根部中点和椎间盘下缘的距离由L1~L5逐渐增加(4.7~6.9mm), L4、L5、L6节段每只犬横突根部中点和椎间盘下缘的距离之间(P=0.925)无明显统计学差异。以脊椎横突根部中点为穿刺点,置入方向和水平面呈20°~30°角,头倾方向5°~15°,穿刺深度1.2cm~1.5cm。若向椎体尾侧穿刺,穿刺针尾的倾角度为30°~35°,进针深度为1.5cm~1.8cm。可以构建犬椎体穿刺手术模型。共成功制作15个犬椎体穿刺手术模型,单节段平均手术时间22.7±4.6min(15~30min)。术中1个椎体节段出现脊髓损伤导致下肢瘫痪、大小便失禁等症状,2个椎体骨皮质破裂,未出现麻醉或感染导致死亡。术后4周的Micro—CT三维重建均显示骨水泥在犬椎体松质骨内分布,新生骨组织包裹植入材料,无渗漏,无椎管及椎体前壁破损等并发症。结论:在犬4~6腰椎解剖基础上,以横突根部中点为骨性标志,可以成功建立一种安全可靠的犬椎体成形术用穿刺模型。

      • 1
    • 基于转录组学测序技术的尘肺差异表达mRNA分析

      梁小乔, 杨颖, 何州烊, 宁丽

      Abstract:

      【】目的 基于转录组学测序技术,观察肺纤维化进程中GIMAP8和SEC14L5的表达变化,为阐明肺纤维化的发生和发展提供理论依据。方法 将雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(磷酸缓冲盐溶液)和模型组(二氧化硅悬液),通过非暴露式气管插管方式在第0天和第14天向模型组小鼠灌注100 mg/mL二氧化硅悬液50μL。第28天时评估小鼠肺功能并处死所有小鼠。对小鼠进行肺组织形态观察、纤维化评价以及mRNA水平的检测。结果 与对照组相比,尘肺组检测出2988种mRNA,筛选出626种显著差异表达的mRNA,其中242种上调,384种下调。富集分析显示,这些差异表达的mRNA主要参与了P53、NF-kappa B、TNF、AMPK等信号通路。对照组小鼠肺结构正常,而模型组小鼠呈现肺泡结构破坏,胶原纤维沉积和纤维团块。肺组织中GIMAP8表达上调,SEC14L5表达下调。模型组小鼠肺功能有所下降。结论 在尘肺患者及矽肺小鼠模型中,GIMAP8和SEC14L5可能参与肺纤维化的发生和发展,这可能为预防和治疗这些疾病提供分子理论基础。

      • 1
    • 封闭群大林姬鼠微卫星标记开发及遗传特传多样性分析

      张晴, 张曦文, 何松, 袁宝, 陈健, 任文陟, 权福实, 胡进平, 丁瑜

      Abstract:

      目的 开发大林姬鼠多态性微卫星标记,丰富大林姬鼠遗传数据,为大林姬鼠遗传质量控制及基因定位等工作奠定基础。方法 基于大林姬鼠基因组序列筛选微卫星位点,挖掘微卫星引物,通过多重 PCR 技术分析群体的遗传多样性。结果 成功开发出30个微卫星标记,利用60份大林姬鼠组织样本对30个微卫星位点进行评价,共检测出152个等位基因,平均观察等位基因数为5.067;平均观察杂合度为0.592;平均香农指数为1.265;平均多态性信息指数(PIC)为0.598。结论 基于本研究所开发的微卫星位点具有较好的多态性,能有效分析大林姬鼠群体的遗传多样性,适合为建立大林姬鼠遗传质量标准和遗传质量检测方法奠定基础。

      • 1
    • 来曲唑诱导大鼠多囊卵巢综合征模型的肠道菌群分析

      杨宏, 张振, 付旭锋

      Abstract:

      目的: 探讨来曲唑(雌激素合成抑制剂)是否会对多囊卵巢综合征患者的肠道微生物群的组成、多样性和丰度有影响。 方法: 利用来曲唑(雌激素合成抑制剂)诱导并构建了PCOS大鼠模型,通过16S rRNA的测序方法分析了正常和PCOS大鼠模型的肠道菌群结构。 结果: 在门水平,PCOS组的厚壁菌门(77.2% vs. 73.3%)的丰度较正常组降低,拟杆菌门(17.2% vs. 23.9%)的丰度增加。在属水平,PCOS的罗氏菌属(16.1% vs. 5.6%)和苏黎世杆菌属(10.0% vs. 1.8%)的丰度较正常组降低,而乳杆菌属(15.9% vs. 18.8%)、普雷沃氏菌属(0.5% vs. 4.6%)和瘤胃球菌属(1.2% vs. 3.0%)的丰度增加,进一步分析了两组差异菌群的KEGG信号通路,结果显示PCOS大鼠模型的肠道内胆汁酸生物合成相关的信号通路发生了变化。 结论: 这些结果为进一步深入研究PCOS患者的微生物结构和功能以及调控机制提供了基础。

      • 1
    • 基于Micro-CT的BALB/c小鼠肺腺瘤动物模型研究

      简芹, 向思睿, 王楚楚, 陈芜, 付西, 由凤鸣, 郑川, 林俊芝

      Abstract:

      目的 建立基于Micro-CT动态表征的BALB/c小鼠肺腺瘤动物模型研究方法。方法 取80只SPF级雌性BALB/c小鼠,随机分为4组:模型低剂量组(1mg·g-1乌拉坦腹腔注射1次)、模型中剂量组(1mg·g-1乌拉坦腹腔注射,1次·周-1,连续2周)、模型高剂量组(1mg·g-1乌拉坦腹腔注射,1次·周-1,连续4周)和空白组(等体积生理盐水腹腔注射)。采用Micro-CT定期监测小鼠肺结节生长情况,Analyze12.0分析系统绘制小鼠肺部3D图像,苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理学变化。结果 与空白组相比,各模型组小鼠第11周时均观测到类圆形高密度影的肺结节。结节形成率随造模周数增加而升高,至第21周时,模型高、中、低剂量组结节形成率分别为93.8%、93.8%、87.5%;结节数分别以2~4个、1个、1~2个为主;低剂量组肺结节最大直径平均值高于中、高剂量组(P<0.05);肺结节体积三组之间差异无统计学意义。HE结果显示模型高、中、低剂量组病理类型均为肺腺瘤。结论 模型各剂量组均成功诱导肺腺瘤,Micro-CT可对小鼠肺结节生长情况进行表征,其中模型中剂量组结节形成率高,肺腺瘤数量适中,模型稳定,更适合小鼠肺腺瘤动物模型的研究。

      • 1
    • 健脾化痰方通过调控FOXO1/PDK4信号通路干预PCOS-IR大鼠脂代谢的作用机制研究

      杨璐瑜, 余曦明

      Abstract:

      目的:探讨健脾化痰方对多囊卵巢综合征合并胰岛素抵抗(PCOS-IR)大鼠脂代谢及叉头盒转录因子-1(FOXO1)/丙酮酸脱氢酶激酶4(PDK4)信号通路的影响。方法:50只雌性大鼠随机分为空白对照组10只和造模组40只。采用高脂饮食(8周)联合来曲唑(第4-8周加入)建立PCOS-IR大鼠模型,通过HOMA-IR、卵巢组织病理观察评估模型。将造模成功的30只大鼠随机分为模型对照组、健脾化痰方组(11.07g/kg)、二甲双胍组(0.2g/kg),每组各10只,药物干预4周。采用苏木素-伊红(HE)染色观察卵巢组织病理学改变;血液生化仪测定空腹血糖(FBG)和血脂(甘油三酯TG、胆固醇TC、高密度脂蛋白HDL-C、低密度脂蛋白LDL-C);酶联免疫吸附(ELISA)法测定性激素(卵泡刺激素FSH、促黄体生成素LH、睾酮T)、胰岛素(FINS)水平;免疫蛋白印迹(WB)法及实时荧光定量PCR法测定卵巢FOXO1、PDK4表达的变化。结果:与空白对照组比较,模型对照组体重明显增加,卵巢多囊性改变明显,糖脂代谢调控失常(P<0.01)。与模型对照组相比,健脾化痰方组大鼠体重增速放缓,卵泡发育情况见好,血清LH、T、LH/FSH、FBG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C降低,E2、FSH升高,卵巢FOXO1、PDK4 mRNA及蛋白表达下调(P<0.05、P<0.01);可升高血清HDL-C含量,但组间差别无统计学意义(P>0.05)。结论:健脾化痰方能有效调节性激素分泌,改善PCOS-IR大鼠卵巢生殖功能,调节糖脂代谢,可能是通过抑制FOXO1/PDK4通路发挥作用。

      • 1
    • 基于数据挖掘的紫癜性肾炎动物模型分析

      程齐, 丁樱

      Abstract:

      目的 基于文献挖掘探讨紫癜性肾炎动物模型的造模特点,为制备规范化的紫癜性肾炎动物模型提供参考。方法 通过计算机检索中国知网、万方、维普、中国生物医学文献数据库、PubMed中英文数据库中相关研究文献,获取近20年紫癜性肾炎动物实验文献,将实验动物种类、造模方法、给药剂量、给药周期、成模标准及检测指标进行人工筛选,应用Microsoft Excel 2021软件建立数据库并进行统计分析,运用SPSS Modeler18.0对高频指标进行关联规则分析并运用Cytoscape 3.6.1软件对关联网络图进行可视化升级。结果 归纳总结符合纳入标准的106篇文献,建立紫癜性肾炎动物模型多选用SD大鼠和KM小鼠,造模方式多选用药源性诱导,造模药物以牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)+脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)+四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)+蓖麻油、卵白蛋白(ovalbumin,OVA)+弗氏完全佐剂、麦胶蛋白+印度墨水、牛血清白蛋白+葡萄糖菌肠毒素B(staphylococcus enterotoxin B,SEB)复刻紫癜性肾炎吻合度较高的动物模型,周期一般在5 ~ 14周,成模标准多选用皮肤紫癜,尿红细胞数增多,尿蛋白阳性,肾组织可见肾小球系膜增生及以免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)为主的免疫复合物沉积于小血管表示造模成功。检测指标共涉及36个医学指标,其中肾及尿液相关的检测指标23个,血液相关检测指标9个,其中使用频率 ≥ 10%的有24 h尿蛋白定量、白细胞介素、肾病理、尿红细胞计数、IgA及循环免疫复合物(circulation immune complex,CIC)、肌酐(creatinine,Cr)等10个指标,对高频指标进行聚类分析,结果表明多采用24 h尿蛋白定量-白细胞介素-肾病理-尿红细胞数-IgA综合评价模型。结论 现有的紫癜性肾炎动物实验多选用SD雄性大鼠和KM雌性小鼠,造模方式多采用药源性诱导,其中瘀热证复合IgA肾病法(病证结合法)具有重复性强、成模率高的优点,可为HSPN动物实验模型选择提供参考。

      • 1
    • 巨噬细胞特异性敲除KLF2基因小鼠模型构建与鉴定

      孟雪, 王新洲, 高水波, 吴鸿

      Abstract:

      目的:建立巨噬细胞特异性敲除Kruppel样因子2(kruppel-Like Factor 2,KLF2)基因小鼠模型,探讨KLF2对巨噬细胞炎症反应的调控作用。 方法:运用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建KLF2flox/+小鼠。通过与Lyz2-Cre+/+小鼠繁育得到目的基因型小鼠,通过基因型鉴定、实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)、western blotting从DNA、RNA、蛋白水平验证KLF2敲除效率。分离培养小鼠骨髓源巨噬细胞(BMDMs),检测LPS(lipopolysaccharide)诱导的炎症相关因子mRNA变化。 结果:建立了KLF2flox/flox/ Lyz2-Cre+基因型小鼠,即巨噬细胞特异性敲除KLF2基因。小鼠骨髓、BMDMs的KLF2 mRNA及蛋白水平显著低于对照组小鼠,而心、肝、肾组织中KLF2 mRNA表达较对照组小鼠无显著变化。两组小鼠的体重、进食、进水、形态无显著差异。在LPS作用下,缺失KLF2的BMDMs炎症相关基因IL-6 mRNA表达水平较对照组显著下降,而IL-1、iNOS、CD86 mRNA表达水平较对照组显著升高。结论:成功构建了巨噬细胞特异性敲除KLF2小鼠模型,为进一步研究巨噬细胞KLF2对临床炎症相关疾病的调控作用及机制奠定基础。

      • 1
    • 成年小鼠心肌细胞腺病毒转染及缺氧/复氧诱导损伤模型的建立

      李笑汝, 姚新叶, 刘佳, 张小玉, 张依曼, 来宝长, 马强, 王一东, 田红燕, 殷倩

      Abstract:

      目的 采用非Langendorff方法分离成年小鼠心肌细胞(adult mouse cardiomyocytes, AMCMs),并建立腺病毒转染及缺氧/复氧诱导细胞损伤模型,为应用AMCMs进行心肌缺血体外实验的研究提供便捷、实用、可操作性强的系统方法。方法 应用非Langendorff方法分离AMCMs,观察贴壁后2 h、24 h、48 h及72 h细胞的形态,计算存活率;应用腺病毒转染AMCMs,观察并统计转染36 h、48 h后的转染效率;通过缺氧45 min/复氧24 h,进行碘化丙啶(ropidium iodide,PI)染色,统计PI阳性细胞率以明确缺氧/复氧损伤模型的建立。结果 与AMCMs贴壁后2 h相比,贴壁后24 h和48 h的细胞存活率无显著下降,贴壁后72 h的细胞存活率显著下降;AMCMs可进行腺病毒转染,36 h和48 h转染效率分别可达82.07±0.60%和82.84±1.18%;缺氧/复氧诱导AMCMs可成功建立细胞损伤模型,PI染色阳性细胞达42.28±3.10%。结论 本研究应用非Langendorff方法分离培养的AMCMs,细胞存活率高,并建立腺病毒转染和缺氧/复氧诱导细胞损伤模型,为体外建立AMCMs基因修饰、缺氧/复氧损伤模型提供了简单易行的系统方法。

      • 1
    • 肠道应激损伤与色氨酸代谢对其调控作用的研究进展

      陈菁青, 郑建华, 董巧燕, 张文盛, 马连素, 邱业峰

      Abstract:

      肠道是动物体内最大的免疫器官,也是机体主要的消化、吸收、代谢场所,维持肠道稳态健康是维护动物机体健康的重要保障。研究表明应激易使肠屏障受损、通透性增加、肠道功能紊乱,引发肠道应激损伤。色氨酸是哺乳动物的一种必需氨基酸,具有改变肠道菌群组成与代谢,提高肠道黏膜屏障的功能,在维持肠道稳态方面发挥着重要作用。应激状态下大脑和肠道组织色氨酸及其代谢产物含量的异常,提示色氨酸可能在应激反应中具有重要作用。因此,深入探究应激因素的致病机制,揭示色氨酸及其代谢产物对应激动物肠道功能紊乱的调节作用,可为肠道应激损伤提供安全便捷有效的营养防治措施。本文主要就目前应激机制研究进展、肠道应激损伤与色氨酸代谢对肠应激损伤调控作用的研究现状及最新研究进展进行综述。

      • 1
    • 基于网络药理学探讨EGCG对顺铂所致大鼠急性肾损伤的保护作用

      杨春雪, 徐恩爽, 张风, 郑家三

      Abstract:

      目的 基于网络药理学评价表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对顺铂(Cisplatin,CIS)诱导的大鼠急性肾损伤(AKI)保护效果。方法 32只雄性Wistar大鼠,随机分为对照组(CON组)、EGCG组、顺铂组(CIS组)、CIS+EGCG组。CON组和CIS组灌胃生理盐水,EGCG和CIS+EGCG组灌胃EGCG(40 mg/kg),连续28天,第26天CIS组、CIS+EGCG组腹腔注射CIS(7 mg/kg),第29天收集血液和组织。检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)水平;HE染色观察肾脏病理变化;TUNEL检测肾组织细胞凋亡情况;TCMSP、Gene Cards、OMIM网站筛选药物与疾病靶点,取交集后构建蛋白质-蛋白质互作网络(PPI),进行GO功能及KEGG通路富集分析,Western Blot、QRT-PCR及免疫组化验证分析结果。结果 EGCG预处理明显降低AKI大鼠血清中BUN、SCr的水平,改善AKI大鼠肾脏病变,缓解AKI大鼠肾组织凋亡;网络药理学筛选出87个EGCG与AKI交集基因,25个核心靶点,通过PI3K/AKT等信号通路和多种生物过程影响AKI的发展。结论 EGCG通过PI3K-AKT信号通路缓解CIS所致大鼠急性肾损伤。

      • 1
    • 海人藻酸建立内侧颞叶癫痫小鼠模型的研究

      叶祖亮, 苗育静, 刘全磊, 朱权, 魏鹏虎

      Abstract:

      目的 本研究采用立体定向手术在一侧海马注射KA,建立内侧颞叶癫痫(medial temporal lobe epilepsy, MTLE)慢性模型,通过行为学、电生理学和病理学验证其有效性。方法 取健康的C57BL/6野生型雄鼠22只,随机分成对照组(n=6)和实验组即KA注射组(n=16)。对照组和实验组分别在海马CA3区进行微量注射生理盐水和KA,一周后再次进行立体定向手术,植入脑电记录电极。植入术后一周开始记录小鼠脑电活动,统计癫痫发作次数和持续时间。通过对小鼠的观察与记录,分别从行为学、电生理学和病理学方面验证慢性癫痫模型。结果 本实验对22只C57BL/6野生型雄鼠进行实验,对照组(n=6)均无癫痫发作,而实验组(n=16)存活的小鼠均出现癫痫发作。成模的小鼠在行为学上发生了凝视、咀嚼、头面部肌肉抽搐、肢体痉挛等慢性癫痫自发发作行为,有2只小鼠因手术死亡,4只小鼠在急性发作期死亡,10只小鼠模型成功建立;脑电图呈内侧颞叶癫痫样脑电图改变;在病理组织学方面,经免疫荧光染色发现:CA3区神经元丢失,星形胶质细胞大量增生,符合海马硬化特征性的病理改变。结论 通过使用KA单侧、单次颅内注射构建的模型具有耗时短,易操作,易成型等多项优势,该模型展现出与人类MTLE相似的脑电图、行为与神经病理改变,有助于研究有效治疗颞叶癫痫的药物,是癫痫外科手术预后判断的理想动物模型。

      • 1
    • 斑马鱼快速骨质疏松模型方法的建立与优化

      毛洪运, 刘雨彤, 赵心月, 姜德利, 王晓仪, 赵珂璇, 华永庆, 许惠琴

      Abstract:

      目的 本文通过比较常见斑马鱼骨质疏松(OP)模型不同建立方法,优化建立一种快速、稳定、灵敏的造模方法。 方法:采用铁过载及泼尼松龙(Pred)诱导OP模型,观察骨形成情况及动物死亡率。铁过载诱导法采用枸橼酸铁铵(FAC)为造模药物。Pred诱导法有Pred-3 dpf(day post fertilization)法,造模时间为3 ~ 9 dpf;Pred- 5 dpf法,造模时间为5 ~ 10 dpf;Pred撤药法,3 dpf开始造模,7 ~ 9 dpf每天撤去1/3造模药物。进而比较常用药物阿尔法骨化醇(AC)、骨化三醇(CA)、阿仑膦酸钠(AL)抗OP的干预效应,选择稳定、灵敏的阳性药,并进一步对不同染色方法及染色条件进行优化。 结果:FAC在500 μg/mL剂量下未能观察到对骨形成的显著影响。骨节数及第一椎骨长度结果显示,与空白组比较,Pred-3 dpf诱导法模型组均显著降低(P < 0.01,P < 0.05),但斑马鱼死亡率较高;Pred-5 dpf法无显著差异;Pred撤药法模型组均显著降低(P < 0.01),且无死亡。给予AC、CA、AL后均具有抗OP作用,CA抗OP作用更为灵敏、稳定。茜素红(ARS)染色参数优化结果显示,染色浓度为0.02%,染色2 h,0.5% KOH和甘油分别以(3:1,3 h)和(1:1,14 h)洗涤条件为最佳。化学染色对比结果显示,钙黄绿素对骨节部位染色较为灵敏,ARS则对第一椎骨处染色较为灵敏。 结论:采用Pred撤药法诱导的斑马鱼OP模型更为快速、稳定、灵敏,是OP研究的稳定可靠模型。

      • 1
    • 母体炎性暴露对子代小鼠受IRBP抗原诱导的EAU影响

      徐菲, 刘健萍, 董世访, 皇辉, 龚心怡, 胡开娇, 陈飞兰

      Abstract:

      目的 探讨母体葡萄膜炎暴露对子代小鼠受视网膜抗原IRBP(interphotoreceptor retinoid-binging protein,IRBP)诱导的实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)免疫效应的影响。 方法 从我们课题组前期获得的受双亲EAU暴露的子代C57BL/6J小鼠眼球中的RNA测序转录组数据中,筛选免疫相关差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)。利用基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)的富集分析,确定这些免疫相关的差异表达基因生物学途径。通过蛋白质互作网络(protein-protein interaction networks,PPI)分析交集基因以此鉴定出枢纽基因。荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,q-PCR)进一步确定筛选出的异常表达的枢钮基因是否也在受母本葡萄膜炎影响的子代小鼠中差异表达,最后通过视网膜抗原IRBP651-670诱导受母本活动期炎症影响的子代以评价母体葡萄膜炎对子代患葡萄膜炎的易感性以及相关免疫免疫效应的影响。 结果 从受双亲葡萄膜炎影响的子小鼠眼球组织中鉴定出72个免疫相关差异基因。这些基因主要富集参与Toll样受体信号通路、MAPK信号通路以及B细胞受体信号通路等。进一步PPI网络互作分析,筛选出proteasome 26S subunit, ATPase 5(Psmc5)、proteasome 26S subunit, ATPase 3(Psmc3)、proteasome 26S subunit ubiquitin receptor, non-ATPase 4(Psmd4)和proteasome 26S subunit, non-ATPase 8(Psmd8)四个枢纽基因。q-PCR检测证实受母本葡萄膜炎影响的子代小鼠中也上调表达这4个枢纽基因。而且与正常子代相比,150 μg IRBP抗原诱导可增加受活动期炎症影响的子代EAU临床表现的严重程度和病理组织学损伤(P = 0.0087;P = 0.0410);另外,受母体活动期炎性影响的子代在IRBP诱导的EAU中脾脏T细胞增殖功能增强,其血清中产生更高的炎性细胞因子IL-17和IL-6(P = 0.0450;P = 0.0300)。 结论 母体活动性炎症暴露加剧子代小鼠受IRBP诱导的EAU疾病的严重性,增强抗原特异性T细胞增殖以及血清中IL-17、IL-6的产生,可能与受影响的子代上调表达的4个枢钮基因Psmc5、Psmc3、Psmd4、Psmd8相关。

      • 1
    • 小鼠肝癌原位移植模型的建立

      潘蕊, 喻锟, 张海亮, 郑永仁, 赵笑雨, 唐钧泽, 吴健铭, 程欣

      Abstract:

      【摘要】 目的 比较用肿瘤细胞注射和肿瘤组织块移植建立小鼠肝癌原位模型的方法,为小鼠肝癌原位模型的建立提供技术参考。方法 取健康雄性KM小鼠,随机分为四组:A组采用注射小鼠肝癌H22细胞;B组采用注射腹水型肝癌H22细胞;C组采用小鼠肝癌组织块移植法。D组肝部注射生理盐水作为假手术组。定期观察各组小鼠活动情况、体重变化。记录四组小鼠的生存时间。观察各组小鼠肝部成瘤状况、肿瘤程度、与腹腔脏器粘连程度和转移情况,并进行B超成像,检测血清中甲胎蛋白(AFP)、异常凝血酶原(DCP)的浓度及HE染色观察肝脏组织病理学变化。结果 A、B、C三组小鼠造模操作时间分别为(3.36±0.44)min、(3.30±0.41)min、(5.68±0.65)min。建模第25 d,A、B、C三组小鼠成瘤率均100.0%,A组腹腔重度粘连率为40.0%,B组重度粘连率为60.0%,C组与D组均未出现重度腹腔粘连。A、B、C组小鼠腹水出现率分别为40.0%、100.0%、0.0%;腹壁瘤出现率分别为30.0%、60.0%、0.0%。B组小鼠还存在肝转移情况(40.0%)。B超成像、血清AFP和DCP水平检测、组织病理学检查结果显示,与D组小鼠相比,A、B、C三组小鼠肝边缘均不光滑,回声欠均匀,可见稍低回声包块;保持AFP、DCP高分泌;存在大量炎症细胞与肿瘤细胞。结论三种方法均可以建立肝癌原位移植模型,可作为评价药物抗肝癌效果的理想模型。

      • 1
    • 调补肺肾三法通过抑制ERK1/2信号通路改善COPD大鼠气道黏液高分泌

      李高峰, 刘淑娟, 李亚, 李素云, 范正媛, 沈婷婷

      Abstract:

      目的 探究调补肺肾三法对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)稳定期大鼠气道黏液高分泌的影响及作用机制。方法 90只大鼠随机分为对照组、模型组、补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组、PD98059组、补肺健脾联合PD98059组、补肺益肾联合PD98059组和益气滋肾联合PD98059组。第1 ~ 8周采用香烟烟雾暴露联合细菌反复感染的方法建立COPD大鼠模型,9 ~ 16周Control组和COPD组给予生理盐水2 mL/只,中药治疗组给予对应的调补肺肾三方灌胃,第16周PD98059组与联合组给予PD98059腹腔注射7天。16周结束后取材,检测大鼠肺功能、肺组织形态、肺组织水含量、BALF中炎性细胞计数和血清炎性因子水平。AB-PAS染色和免疫组化法分别检测杯状细胞比例和Muc5AC、Muc5B表达。PCR检测ERK1、ERK2、ENaC、CFTR、AQP5 mRNA表达。Western Blot测定肺组织中ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表达。结果 与Control组比较,COPD组大鼠TV、MV、FVC、FEV0.1及FEV0.1/FVC均显著下降(P<0.01);肺病理显示肺泡紊乱,肺泡壁大量断裂,气管壁严重皱缩增厚,周围有大量炎性细胞浸润;肺组织水含量明显升高(P<0.01);BALF中巨噬细胞比例显著降低(P<0.01),中性粒细胞和淋巴细胞比例显著升高(P<0.01);血清炎性因子TNF-α、IL-1β水平显著增高(P<0.01);气道上皮杯状细胞比例和Muc5AC、Muc5B表达水平均显著升高(P<0.01);肺组织ERK1、ERK2、ENaC mRNA表达量均明显升高(P<0.01),CFTR和AQP5 mRNA的表达均明显降低(P<0.01);肺组织P-ERK/ERK表达明显升高(P<0.01);与COPD组比较,各治疗组能不同程度改善上述指标变化(P<0.05),以调补肺肾三方联合PD98059组较对应单一治疗组效果更为显著(P<0.05)。结论 调补肺肾三法通过抑制ERK1/2信号通路改善COPD大鼠气道黏液高分泌。

      • 1
    • 小肠过表达Ski蛋白对扭体小鼠的抑炎镇痛作用

      熊翱, 罗飞

      Abstract:

      目的:研究小肠过表达Ski蛋白对醋酸致扭体小鼠的抑炎镇痛作用。方法:选取8周龄雄性ICR小鼠 ,给予腹腔注射现配的0.7 %醋酸溶液(0.1 ml/10 g体重)诱发扭体反应。实验小鼠分为Sham组、醋酸组、醋酸+布洛芬组、醋酸+Ad-EGFP 组 、醋酸+Ad-ski-1 组 和? 醋酸+Ad-ski-2 组,每组10只。观察并记录第一次扭体出现的潜伏期,同时记录15分钟内的扭体次数。获取标记的小肠组织,鉴定腺病毒转染效果,检测促炎因子、疼痛生物标志物的蛋白表达量,进一步分析NF-kB p65的蛋白表达及其与Ski蛋白的结合情况。结果:腹腔注射Ad-ski腺病毒后,小肠成功过表达Ski蛋白。过表达的Ski蛋白延长了小鼠发生扭体的潜伏期,同时减少了扭体反应的频率,与布洛芬的效果相当(P>0.05 )。与醋酸组比较,过表达的Ski蛋白显著抑制了促炎因子和疼痛生物标志物的蛋白表达(*P < 0.05,**P < 0.01)。而且NF-kB p65与Ski有复合物形成。结论:过表达Ski蛋白通过抑制炎症因子和疼痛生物标志物蛋白表达对醋酸引起的炎性疼痛有抑炎镇痛作用,而且与Ski调节NF-kB信号通路有关。

      • 1
    • 智能针灸机器人针刺可行性及安全性评价实验动物平台建立的探索

      马唯刚, 潘兴芳, 邱继文, 高卫芳, 张永龙, 董钰格, 唐瑜紫, 任海燕, 李忠正

      Abstract:

      目的:智能针灸机器人研发正处于初期探索阶段,缺少可靠的实验研究平台。本研究旨在探索智能针灸机器人针刺可行性及安全性评价的实验动物平台,为后续进一步开展研究奠定基础。方法:将6只2月龄广西巴马小型猪作为实验对象,进行麻醉后针刺验证。首先进行人工针刺验证,每只实验动物选取6个穴位,行提插捻转手法后留针20 min,并进行自身前后对照。实验共进行28天,每两天进行一次实验,共10次。人工针刺验证后在已选6个穴位的基础上每个穴旁10 mm处取一点,共12点,使用针灸机器人智能针刺模块对实验动物进行不同频率及角度的针刺操作进一步验证动物平台的稳定性及可行性。结果:血常规中安全性相关指标均无异常,较自身前后对比稳定。血生化指标无异常,较自身前后对比稳定。在实验全程监测中动物的平均心率为126 次/分。实验动物的平均血压为87/36mmHg。巴马小型猪在室温25℃下的平均体温为36℃。体温在实验过程中及实验前后均无明显的变化。在搭建的实验平台基础上,针灸机器人智能针刺模块针刺手法操作预试验均顺利完成,实验过程中未出现针刺相关异常情况如弯针、断针、滞针等,实验动物未出现明显异常。结论:本研究借鉴了已有的小型猪实验方法,初步建立起了稳定的智能针灸机器人针刺可行性及安全性评价实验动物平台,为进一步的智能针灸机器人相关研究开展奠定基础。

      • 1
    • 非酒精性脂肪性肝病大鼠的血清溶血磷脂酰胆碱和氨基酸代谢轮廓研究

      赵梅玉, 史欣悦, 周姝伶, 李海军, 樊淑婷, 熊印华

      Abstract:

      目的 利用代谢组学手段研究非酒精性脂肪性肝病 (nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠血清的氨基酸和溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)代谢轮廓,寻找可表征NAFLD的生物标志物并推测NAFLD发生的可能机制。方法 通过喂养高脂饮食饲料和腹腔注射四氯化碳制备NAFLD大鼠,采用液相色谱-质谱联用技术测定对照组和NAFLD组的大鼠血清中15种LPCs和18 种氨基酸的含量;采用主成分分析和正交偏最小二乘法-判别分析等方法分析大鼠NAFLD肝损伤后血清中溶血磷脂酰胆碱和氨基酸代谢轮廓的变化,运用Pearson相关分析方法分析生物标志物与NAFLD的相关性。结果 NAFLD组的大鼠血清溶血磷脂酰胆碱和氨基酸代谢轮廓明显偏离对照组,且能完全区分开;LPC(20:1)、精氨酸和谷氨酸对NAFLD有显著贡献,这3个代谢物被鉴定为生物标志物;LPC(20:1)和精氨酸与AST、ALT、LDL、TBIL等血清生化指标显著相关。结论 血清溶血磷脂酰胆碱和氨基酸的代谢轮廓与NAFLD密切相关。

      • 1
    • 奥拉帕尼诱导乳腺癌MCF-7细胞衰老作用及其机制

      王大伟, 郭晶, 边继春, 王莎莎, 卢美超, 张岱州, 贾玉萍

      Abstract:

      目的 研究奥拉帕尼(Olaparib)诱导乳腺癌MCF-7细胞衰老作用的表现及其相关分子水平作用机制。方法 利用实时细胞分析(real-time cell analysis,RTCA)实时动态检测抗增殖和抗迁移活性;应用衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase,SA-β-gal)染色法观察诱导细胞衰老活性;通过qPCR分析奥拉帕尼对衰老相关基因p16INK4a、p21、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-8、纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor 1, PAI-1)、磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10,PTEN)、p27、视网膜母细胞瘤蛋白1(retinoblastoma protein,RB1)、Ki67和E2F1表达的影响;根据Western Blot分析奥拉帕尼对衰老相关蛋白p21、γH2AX、胰岛素样生长因子结合蛋白3(insulin-like growth factor binding protein 3,IGFBP3)、cyclin D1、pRB和Ki67表达的影响。结果 奥拉帕尼能够抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移并诱导MCF-7细胞的衰老;奥拉帕尼作用96 h的MCF-7细胞中p16INK4a、p21、p27、CHOP、IL-6、IL-8、PAI-1、PTEN和RB1的基因表达水平显著上调(P < 0.01),Ki67和E2F1的基因表达水平显著下调(P < 0.01);MCF-7细胞中p21、γH2AX和IGFBP3蛋白的表达水平显著升高(P < 0.01;P < 0.01;P < 0.05),cyclin D1、pRB和Ki67蛋白的表达水平显著降低(P < 0.05;P < 0.01;P < 0.05)。结论 奥拉帕尼能够通过抗增殖、迁移和诱导细胞衰老产生抗乳腺癌MCF-7细胞作用。

      • 1
    • 基于斑马鱼模型探讨八宝丹对阿霉素所致心肌损伤的保护作用及其机制

      李宪美, 曾来凤, 黄彬, 余岚心, 林久茂

      Abstract:

      目的 采用斑马鱼模型探讨八宝丹对阿霉素所致心脏损伤的保护作用及其机制。 方法 建立化疗药物阿霉素(Doxorubicin, Dox)诱导的斑马鱼心肌损伤模型,在体视显微镜下观察八宝丹(BBD)在不同浓度下对心包水肿比例及心率的干预作用;采用转基因斑马鱼Tg(mpx:EGFP)原位观察八宝丹对心脏中性粒细胞浸润的抑制作用;观察八宝丹对超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及丙二醛(MDA)的影响;Real-time qPCR检测铁死亡相关因子包括谷胱甘肽过氧化物酶4(gpx4a)、前列腺素内过氧化物合成酶(ptgs2)、花生四烯酸5脂氧合酶(alox5a)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acsl4)的mRNA表达;采用亚铁离子荧光探针检测斑马鱼心脏亚铁离子的积累情况。 结果 八宝丹能够减缓Dox导致的斑马鱼心包水肿和心率减慢,减少心脏中性粒细胞的浸润(P<0.05);降低MDA的浓度(P<0.05),同时增强SOD和CAT的活性(P<0.05);显著抑制铁死亡,减少斑马鱼心脏亚铁离子的积累,抑制ptgs2、alox5a、acsl4的表达(P<0.05),同时促进gpx4a的表达(P<0.05)。 结论 八宝丹通过抑制脂质过氧化的发生调节铁死亡从而减弱Dox诱导的斑马鱼心肌损伤,改善心功能。

      • 1
    • 腹主动脉瘤动物模型的研究现状与转化应用

      夏聪聪, 刘浩乐, 侯海雯, 刘恩岐, 赵四海

      Abstract:

      【摘要】 随着我国人口老龄化趋势加剧,腹主动脉瘤发病率逐渐升高。由于动脉瘤破裂后死亡率极高,该病已经成为危害我国人群健康的重要疾病之一。在组织病理学上,腹主动脉瘤表现为中膜平滑肌细胞耗竭、弹力纤维断裂和退化、细胞外基质降解和血管局部炎症反应等。目前,临床上腹主动脉瘤的治疗多以血管内介入治疗为主,缺乏药物治疗手段,这也与该病致病机制迄今仍未被完全阐明有关。目前腹主动脉瘤动物模型主要以啮齿类实验动物模型(小鼠和大鼠)为主,也有部分中、大型实验动物模型(如兔、豚鼠、犬和猪等)。在造模方法上,主要包含弹性蛋白酶动脉腔内灌注法、血管紧张素II输注法、氯化钙涂抹法和血管组织移植法等。部分药物或手术腹主动脉瘤模型由于前期诱导刺激的停止,诱导后动脉瘤趋于稳定。开发允许腹主动脉瘤持续发展,甚至可以在人为刺激下诱导破裂的,更符合人动脉瘤发展规律的模型是今后的造模研究方向之一。实验动物模型在阐明腹主动脉瘤发病机制、开发治疗动脉瘤新药和评价相关治疗策略安全性的重要研究工具。因此,本文综述了目前常用的腹主动脉瘤造模方法和其在临床前转化研究中的应用。

      • 1
    • 肝脏特异性RBP4转基因小鼠的建立及糖代谢特征分析

      卢婉贤, 马琦, 王黎, 刘梦迪, 郭宝平

      Abstract:

      目的:构建肝脏特异性Rbp4敲除小鼠模型并初步探索肝脏RBP4对糖代谢的影响。方法:LoxP标记的RBP4flox/+小鼠与Alb-Cre工具鼠通过多次繁殖杂交,获得纯合型肝脏特异性Rbp4敲除(Rbp4flox /flox :Cre+)小鼠模型。琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型。选取18周龄雄鼠,将实验小鼠分为肝脏特异性Rbp4敲除小鼠组(Rbp4flox/flox:Cre+,n=10)、同窝对照小鼠组(Rbp4flox/flox,n=10)、野生型小鼠组(WT,n=10)。使用Western blot及qRT-PCR检测肝脏中Rbp4蛋白、mRNA表达水平及其他组织中Rbp4 mRNA表达水平,验证特异性敲除结果。使用HE染色观察小鼠肝脏组织形态变化。测定第18周末葡萄糖耐量及胰岛素耐量。使用qRT-PCR检测肝脏糖代谢基因磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(Pepck)和葡萄糖-6-磷酸酶(G6pase)的表达。 结果:Western blot及qRT-PCR结果表明Rbp4flox/flox:Cre+组小鼠肝脏中Rbp4表达减少(P<0.05)。HE染色、葡萄糖耐量及胰岛素耐量结果表明肝脏特异性Rbp4敲除对肝脏组织形态、葡萄糖耐量及胰岛素耐量无显著影响。与WT组小鼠相比,Rbp4flox/flox组小鼠Pepck mRNA相对表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05),Rbp4flox/flox:Cre+组小鼠肝脏中Pepck mRNA相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。与Rbp4flox/flox组小鼠相比,Rbp4flox/flox:Cre+组小鼠肝脏中Pepck mRNA相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。三组小鼠肝脏中G6pase mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。 结论:成功构建了肝脏特异性Rbp4敲除小鼠模型。在正常生理条件下,肝脏特异性Rbp4敲除对小鼠肝脏组织形态、葡萄糖耐量及胰岛素耐量无影响,使肝脏糖代谢基因Pepck mRNA表达减少,提示RBP4在肝脏糖代谢中发挥一定的作用。

      • 1
    • 血友病性关节炎动物模型的研究进展

      林锟

      Abstract:

      血友病的反复出血并发血友病性关节炎(Hemophilia Arthritis, HA),严重影响患者生活,消耗大量社会医疗资源,受限于伦理要求,需要建立HA动物模型进行研究。为了总结血友病性关节炎动物模型的研究进展,本文查阅近年国内外有关动物HA模型的研究文献,从物种选择、建模方法以及组织病理学、影像学评价方法等方面进行综述。

      • 1
    • 脾虚证实验动物模型构建及评价方法的研究述评

      张永龙, 马唯刚, 钱星羽, 赵素红, 李姗姗, 郭义, 郭永明, 徐枝芳, 潘兴芳, 邱继文, 李忠正

      Abstract:

      中医症候实验动物模型的构建在中医药作用机理研究方面起到重要的平台支撑作用,近年来脾虚证动物模型的构建和评价文献报道越来越多,但是构建方法标准不一,评价指标客观化不足,本文将从动物选取、模型建立、宏观表征、行为学实验、脾虚的客观指标等方面总结脾虚动物模型的构建和评价方法,以期为脾虚证实验动物模型的构建提供理论指导,为脾虚动物模型平台的选取提供文献参考。

      • 1
    • 肌少症小鼠模型的研究进展

      贾新傲, 唐玉娇

      Abstract:

      通过对肌少症相关文献检索进行了研究,总结出肌少症小鼠建模方法与模型评价方案。对药物注射、衰老、肌肉萎缩和转基因四种造模方式的操作方法、优缺点、适用范围进行了综述,总结了肌肉功能、肌肉力量、肌肉耐力三种肌少症小鼠模型的评价方式,对比其优缺点,以期为肌少症的后期研究提供参考。

      • 1
    • 猫棒束孢联合环磷酰胺对肝癌H22荷瘤小鼠的治疗作用

      史晓伟, 陈静静, 余国彦, 张艺尹, 陈丽霞, 赵莉莉, 杨永明, 王靖, 阎磊, 杨喜花

      Abstract:

      【摘要】目的 研究冬虫夏草来源的猫棒束孢(Isaria felina,IF)联合环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)对肝癌H22荷瘤小鼠的治疗作用。方法 建立H22荷瘤小鼠模型,随机分组,设正常对照组(NC, 蒸馏水)、模型对照组(MC, 蒸馏水)、CTX组(25 mg/kg)、IF给药组(400 mg/kg)和联合给药组(IF 400 mg/kg + CTX 25 mg/kg),每组5只小鼠;蒸馏水、IF灌胃给药,CTX腹腔注射给药,连续给药10 d。实验结束后,检测各组小鼠平均肿瘤体积和瘤重、抑瘤率、q值、血常规、免疫器官脏器指数、血清细胞因子含量; 观察肿瘤组织苏木精-尹红(HE)染色病理形态变化。结果 各给药组小鼠的肿瘤体积和质量均显著低于MC组(P < 0.05)。CTX组、IF组、IF + CTX组小鼠的抑瘤率分别为49.3%、34.2%、72.8%,q值为1.09。IF + CTX组小白细胞(WBC)、淋巴细胞(Lymph)、血小板(PLT)数量显著高于CTX组(P < 0.05)。MC组小鼠的脾指数显著高于NC组,IF + CTX组小鼠脾指数显著低于MC组(P < 0.05)。MC组小鼠的血清IFN-γ水平显著低于NC组,IF组和IF + CTX组的IFN-γ水平显著高于MC组和CTX组(P < 0.05)。MC组肿瘤细胞生长状态良好,数量多,排列紧密;CTX、IF、和IF + CTX组肿瘤组织肿瘤细胞排列松散,多处可见肿瘤细胞灶性坏死, 坏死细胞胞核固缩碎裂。结论 IF和CTX联用对H22荷瘤小鼠有相加的抑瘤作用,可减轻CTX所致机体免疫功能抑制、骨髓抑制,具有免疫调节功能。 【关键词】猫棒束孢;H22荷瘤小鼠;联合给药;免疫调节

      • 1
    • 木糖葡萄球菌荧光PCR检测方法的建立及其应用

      于灵芝, 冯丽萍, 孔志豪, 朱琦, 魏晓锋

      Abstract:

      目的 本研究拟通过荧光定量PCR方法,建立一种木糖葡萄球菌快速灵敏的检测方法并进行应用评价。方法 本研究选择特异性gehM基因片段作为靶标合成了一套引物,建立了木糖葡萄球菌检测的qPCR方法。对木糖葡萄球菌标准菌株和其他非木糖葡萄球目标菌进行特异性分析。将木糖葡萄球菌的DNA进行10倍稀释测定其灵敏度。用送检的样本进行了临床应用并测序验证,同时与细菌培养法进行比较。结果 仅木糖葡萄球菌出现特异性扩增曲线,而其他非木糖葡萄球目标菌未出现,表明设计的引物对木糖葡萄球菌具有特异性,灵敏度为100 fg/μL,组内和组间重复性均小于3%。共检测60份临床样品,有5份样品扩增曲线为典型的S曲线,将该PCR产物测序并BLAST,该基因序列与木糖葡萄球菌的相似度为99.63%,表明该样本木糖葡萄球菌为阳性,所检样本的阳性率为8.3%,而培养法的阳性率为6.7%,荧光PCR方法阳性检出率比培养法略高。结论 本研究建立的木糖葡萄球菌的qPCR方法,,具有快速、灵敏度高、特异性强和重复性好的优点,可用于实验动物木糖葡萄球菌的检测。

      • 1
    • 冠心宁片抑制NLRP3/ASC/Caspase-1通路改善阿霉素诱导的心衰大鼠心肌细胞焦亡

      施佳君, 杨钦钦, 富丹婷, 郑纯威, 张燕, 陈宇

      Abstract:

      【摘要】目的 研究冠心宁片对扩张型心肌病(dilated ca rdiomyopathy,DCM)的保护作用,并从NLRP3/ASC/Caspase-1通路深入探讨其对心肌细胞焦亡的作用机制。方法 随机将大鼠分为冠心宁片低剂量组、冠心宁片高剂量组、阳性药地高辛组、模型对照组和正常对照组,通过阿霉素(doxorubicin,DOX)累积注射17.5 mg/kg诱导大鼠DCM模型,同时连续给药10周。超声心动图检测心功能指标,ELISA检测血清IL-1β和IL-18水平,RT-PCR法检测心肌组织NLRP3、ASC、Caspase-1、NF-κB、TXNIP、IL-1β和IL-18的mRNA表达,免疫组化、免疫荧光染色和western blotting检测NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18、GSDMD、GSDMD-NT的蛋白表达及TUNEL染色结果,透射电镜观察心肌细胞显微结构的变化。结果 与正常对照组比,模型对照组的IVSs、IVSd、LVPWs、FS、SV、EF和HR显著降低,LVIDs、ESV及血清IL-1β、IL-18显著增加,NLRP3、ASC、Caspase-1、NF-κB、TXNIP、IL-1β和IL-18的mRNA表达均显著增加,NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18的蛋白表达及TUNEL染色面积明显增加,显微结构明显改变。与模型对照组相比,冠心宁片可显著增加IVSs、SV、FS、EF和HR,显著降低LVIDs、ESV和血清IL-1β、IL-18水平,降低心衰大鼠的NLRP3、ASC、Caspase-1、NF-κB、TXNIP、IL-1β、IL-18的mRNA和NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18的蛋白水平及TUNEL染色面积,显微结构明显改善。结论 冠心宁片可以有效改善阿霉素诱导的扩张型心肌病,可能是通过抑制NLRP3/ASC/Caspase-1通路改善扩张型心肌病大鼠的心肌细胞焦亡实现的。

      • 1
    • 乙酸灌肠联合束缚夹尾应激诱导肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征大鼠模型的制备

      赖碧玉, 洪梦颖, 何永嘉, 陈瑶, 李新伍, 李兴, 佘畅, 李丹, 石佳, 田子寒

      Abstract:

      【摘 要】目的 建立理想的大鼠肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征的造模方法,为IBS-D(Diarrhea Predominant Irritable Bowel Syndrome,IBS-D)伴焦虑抑郁状态的临床研究提供动物模型基础。方法 本研究共用60只大鼠,阶段一 将20只大鼠随机分为空白组、3%乙酸灌肠组、4%乙酸灌肠组、5%乙酸灌肠组,分别于干预第一天予以3%、4%、5%浓度乙酸灌肠,观察1周后,评估出适宜乙酸浓度;阶段二 将40只大鼠随机分为空白组、单纯乙酸灌肠组、乙酸+束缚组、乙酸+束缚+夹尾组,分别予以不同干预,共干预8天。干预结束后对大鼠一般情况、腹泻相关指数、旷场实验评分、结肠病理组织学等指标进行评价。结果 阶段一,与空白组比较,4%乙酸灌肠组干预后1-3天粪便性状评分升高(P<0.05),干预后第4-7天粪便性状评分逐渐降低,第7天与空白组已无显著性差异(P>0.05),干预1周后体质量相对较低(P<0.05),粪便含水量升高(P<0.01);与空白组相比,5%乙酸灌肠组体质量降低(P<0.05),粪便性状评分、粪便含水量、腹泻指数升高(P<0.01);3%乙酸灌肠组与空白组无显著差异;阶段二 与空白组比较,单纯乙酸灌肠组体质量较低(P<0.01),粪便含水量、腹泻指数升高(P<0.01),与空白组及单纯乙酸灌肠组比较,乙酸+束缚组、乙酸+束缚+夹尾组,体质量较低(P<0.01),粪便性状评分、粪便含水量、腹泻指数升高(P<0.01),结肠运转时间减少(P<0.01)。旷场实验评分方面,与空白组及单纯乙酸组相比,乙酸+束缚组及乙酸+束缚+夹尾组旷场实验距离、站立次数、直立次数均(P<0.01);与乙酸+束缚组相比,乙酸+束缚+夹尾组旷场实验距离、站立次数、直立次数均(P<0.05)。结肠病理组织显示,与空白组相比,4%乙酸灌肠组黏膜结构完整,有少量炎症细胞浸润,病理组织评分无显著性差异(P>0.05),5%乙酸灌肠组有中量-大量炎症细胞浸润,病理组织评分升高(P<0.05);阶段二 各组结肠组织黏膜结构完整,有不同程度的少量炎症细胞浸润。结论 4%乙酸浓度为IBS-D造模适宜浓度,叠加束缚后,能更好的模拟IBS-D腹泻、内脏高敏感特征性状态,叠加夹尾后能成功制备出肝郁脾虚型IBS-D模型。

      • 1
    • 基于非靶向代谢组学和肠道菌群探究经典名方泻白散对过敏性哮喘大鼠的保护作用

      杨宗统, 徐东川, 刘瑾, 李晓晶, 张会敏, 王雯慧, 隋在云

      Abstract:

      【摘要】 目的 本研究拟从宿主-肠道菌群-代谢的角度探讨泻白散保护过敏性哮喘大鼠可能的微观机制。方法 将SPF级SD大鼠分为对照组、模型组和泻白散组通过卵清白蛋白(OVA)诱导建立大鼠过敏性哮喘模型;HE染色观察大鼠肺组织病理学变化;取结肠内容物进行16S rRNA高通量测序,观察肠道菌群结构与功能的变化;采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱法(UHPLC-Q-TOF/MS)分别进行血清样本和肺组织样本非靶向代谢组学检测。结果 HE染色结果显示:与对照组相比,泻白散组可以在一定程度改善哮喘大鼠肺部组织形态结构;16S rRNA高通量测序结果显示:模型组肠道菌群多样性降低,与模型组相比泻白散组肠道菌群多样性得以改善;血清非靶向代谢组学检测结果显示:泻白散组能够调节氨基酸代谢、mTOR等通路,且部分回调模型组引起的差异代谢物表达;肺组织样本非靶向代谢组学检测结果显示,泻白散组能够调节碳代谢、血管平滑肌收缩信号通路和cAMP等信号通路,且部分回调模型组引起的差异代谢物表达。结论 泻白散可能通过改善肺组织形态结构、肠道菌群的多样性以及调控mTOR通路、血管平滑肌收缩信号通路和cAMP等信号通路影响氨基酸代谢、碳代谢等途径发挥对过敏性哮喘大鼠的保护作用。

      • 1
    • 慢性束缚肠道应激损伤小鼠模型的构建与评价

      郑建华, 陈菁青, 董巧燕, 法云智, 邱业峰

      Abstract:

      目的 结合社会心理应激导致炎症性肠病、肠易激综合征等一系列疾病的特点,建立实验性慢性束缚小鼠肠道应激损伤模型,为探讨慢性束缚应激诱导胃肠病的致病机制以及防治措施奠定基础。 方法 18只雄性SPF级BALB/c小鼠,适应7 d后,根据体重按随机数字表法分为2组,对照组及慢性束缚应激组。对小鼠进行束缚应激,每天3 h,连续束缚14 d,建立肠道损伤模型。通过观察体重、肠道组织病理形态变化、检测紧密连接蛋白表达、肠上皮细胞凋亡以及炎症细胞因子mRNA表达水平等指标对模型进行评价。 结果 慢性束缚应激14 d,小鼠表现为体重减轻,十二指肠绒毛高度变短、隐窝结构异常、绒毛/隐窝比下降;结肠黏膜炎性细胞浸润、隐窝结构不规则。蛋白免疫印迹、免疫组化和免疫荧光染色结果显示,慢性束缚应激后小鼠十二指肠和结肠紧密连接蛋白Occludin、Claudin-1表达显著下降(P<0.05);肠上皮细胞凋亡蛋白显著增加(P<0.05)。此外,肠道炎症因子和趋化因子mRNA表达结果显示,慢性束缚应激14 d显著提高了小鼠十二指肠IL-1β、IL-6、MCP-1、TNF-α、IL-10基因的表达(P<0.05);慢性束缚应激14 d显著提高了小鼠结肠IL-1β、IL-6、MCP-1的表达(P<0.001)。 结论 利用小鼠行为限制装置对小鼠连续束缚14 d,导致应激小鼠肠道组织结构异常、肠屏障功能障碍、肠上皮细胞凋亡,引发肠道炎症反应,表明慢性束缚应激肠道损伤小鼠模型构建成功。

      • 1
    • NLRP3敲除小鼠溃疡性结肠炎模型的建立与分析

      王珠环, 张尔馨, 郑沁薇, 郝微微

      Abstract:

      目的:采用不同浓度DSS及给药时间诱导NLRP3-/-小鼠溃疡性结肠炎(UC)模型,并分析与评价其制备的优劣性,为UC发病机制的研究和治疗药物研发提供更贴切临床的动物模型。 方法:SPF级别48只NLRP3-/-小鼠随机分组,采用不同浓度DSS和给药时间(空白组,2.5%7d,3%7d和3%5d)相结合诱导UC小鼠模型,观察和评价小鼠的体质重,DAI评分,HE染色,测结肠长度及相关指标(IL-6、TNF-α和紧密连接蛋白)的表达水平评价造模的效果。结果:1、DSS各小组在不同浓度及给药时间均能诱导UC模型;2、随着浓度梯度增加及给药时间延长,NLRP3-/-小鼠的体质重减轻越显著、粪便潜血呈阳性愈明显、DAI评分越高,甚者出现死亡;3、经HE染色发现,NLRP3-/-小鼠肠黏膜屏障组织病理损伤随DSS给药时间增长或浓度增高而加重;4、采用免疫组织化学方法检测炎症因子及紧密连接蛋白,相对于空白组、模型组的炎症因子(TNF-α及IL-6)的表达水平均有所升高,而紧密连接蛋白水平表达(ZO-1)较空白组有所降低。结论:1、NLRP3-/-小鼠在2.5%7d、3%7d和3%5d条件下均可诱导UC模型;2、结合DAI评分、HE染色和相关指标检测以及小鼠生存率,NLRP3-/-小鼠在3%DSS-5d条件下诱导UC模型更具贴切UC临床表现、更有利后期药物干预。

      • 1
    • AOM/DSS炎-癌转化模型优化并探究结肠癌小鼠肠道菌群的变化

      朱琳, 王敦方, 冯雪, 张彩娟, 刘海帆, 刘雅清, 刘滨, 刘丽, 杨伟鹏

      Abstract:

      【摘要】目的 优化氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)联合葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)造模结肠炎相关性结肠癌(colitis-associated colorectal cancer,CAC)方法,并探究肠道菌群在CAC中的发病机制。方法 通过AOM不同注射次数联合自由饮用DSS的方法建立A(AOM 1次注射)和B(AOM 2次注射)模型组,正常组采用腹腔注射生理盐水联合饮用纯净水,每组10只。造模结束后通过DAI评分、结肠长度、成瘤率及死亡率等指标综合评估,选择最佳的造模方案。然后对B模型组小鼠进行实验,取血清以ELISA法检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及肿瘤标志物CA199、CEA、CA724含量;同时进行HE染色观察结肠病变;并对小鼠粪便进行16S rDNA高通量基因测序法分析,以探究CAC小鼠肠道菌群的变化。结果 单次和加强AOM注射联合DSS均能诱导CAC小鼠模。但与A模型组相比,B模型组小鼠结肠内增生物较大,排列紧密且形态大小较一致,成瘤率达到100%。与正常组相比,B模型组IL-6显著升高(P < 0.05),TNF-α含量升高(P > 0.05);肿瘤标志物除CA724外,CA199和CEA含量均明显升高(P < 0.05);HE病理结肠内炎性细胞的浸润,并伴有管腔表面显示出高级别上皮内肿瘤样改变。菌群结果显示,与正常组相比,CAC小鼠肠道菌物种多样性及丰度降低,疣微菌门和放线菌门增多(P < 0.成05),拟杆菌门和弯曲菌门减少(P < 0.05)。阿克曼菌、普雷沃氏菌、瘤胃球菌、双歧杆菌等显著增多(P < 0.05);罗氏菌属、Muribaculaceae、理研菌属、厌氧原体属等显著减少(P < 0.05)。结论 AOM 2次注射联合自由饮用1.5%(1.5 g/100 mL)DSS诱导的CAC模型小鼠结肠成瘤率高、肿瘤形态大小均一、死亡率低,可作为药效学实验评价的优选造模方案。多种肠道菌群紊乱或功能失调,造成的通透性增高,肠黏膜屏障功能破坏,进而诱发肠源性内毒素释放,导致持续的炎症反应或是诱发CAC发病的间接或直接原因。

      • 1
    • 基于CRISPR/Cas9系统构建裸鼹鼠HIF-1α基因敲除质粒及其功能验证

      张静远, 姜晓龙, 崔淑芳

      Abstract:

      目的 利用簇状规则间隔回文重复序列(CRISPR)/Cas9基因编辑系统构建质粒并敲除裸鼹鼠皮肤成纤维(NMR skin fibroblasts, NSF)细胞HIF-1α基因,为研究裸鼹鼠的耐低氧机制及缺氧相关疾病的发生发展机制提供体外细胞模型。 方法 针对裸鼹鼠HIF-1α基因的1-4号外显子区域设计4对sgRNA序列,并成功构建表达质粒。筛选得到最优sgRNA后,转染HEK-293T细胞收集上清液测定病毒滴度。前期用pLenti-Cas9(blast)病毒感染NSF细胞,之后用制备的HIF-1α-sgRNA病毒感染表达Cas9蛋白的NSF细胞。经药筛后观察荧光表达,同时提取细胞gDNA和蛋白。通过T7E1酶和Western blotting检测NSF细胞中HIF-1α基因变化及蛋白表达情况。 结果 Sanger测序结果显示,所设计的sgRNA成功插入到pX459和pKLV2-U6-sgRNA2载体上,序列验证正确,重组质粒构建成功;T7E1酶切实验成功切除3条带,sgRNA的打靶效率为54%,Western blotting结果表明,经药筛后的裸鼹鼠NSF细胞HIF-1α基因敲除成功,蛋白水平显著降低(P=0.0019);且显微镜下未发现HIF-1α敲除细胞形态的明显变化,基因敲除对细胞增殖能力无明显影响。 结论 成功构建靶向裸鼹鼠HIF-1α基因的CRISPR/Cas9质粒,且质粒靶向敲除HIF-1α基因功能验证成功,将有利于裸鼹鼠耐低氧机制研究,并为人类缺氧相关疾病防治提供理论依据。

      • 1
    • 脓毒症中炎症与凝血功能紊乱的发展进程

      侯媛璐, 赵茹茹, 高磊, 李奇峰, 姚政, 李明泓

      Abstract:

      目的 探讨脓毒症病程中凝血功能的改变。方法 本研究采用基于盲肠结扎穿刺术(cecal ligation and puncture,CLP)改良的复合感染脓毒症大鼠模型(Multiple infection sepsis model,MIM),将 48只雄性 SD 大鼠随机分为空白组(Control组,n = 8)假手术组(Sham 组,n = 8)、复合感染脓毒症模型4h(4h组,n = 8)、8h(8h组,n = 8)、12h(12h组,n = 8)、16h(16h组,n = 8)组,检测炎症指标和凝血相关指标。结果 (1)所有组脓毒症模型大鼠LPS及IL-6含量较Sham组均显著升高(p<0.001),且术后随时间延长,LPS及IL-6含量逐渐升高, 12h后无明显变化;(2)脓毒症模型病程中后期组(8h及8h后)PT较Sham组明显延长(p<0.01);(3)与Sham组相比, 8h组、12h组、16h组APTT时间显著延长(P<0.05,P<0.01),且8h后APTT逐渐延长接近Control组;(4)8h后(不含8h)Fbg含量较Sham组显著增加(p<0.01);(5)脓毒症病程各时间段组均与Control组FDP有显著性差异(p<0.01),而与Sham组无显著差异;(6)脓毒症病程各时间段组AT-Ⅲ较Sham组均显著降低(p<0.01),且AT-Ⅲ随病程呈下降趋势,其中4h组及8h组与16h组比存在显著差异。结论 随着脓毒症病程发展,炎症水平不断升高并诱发凝血功能紊乱:脓毒症中后期PT及APTT时间明显增长,且Fbg快速升高,提示造模手术后内外源性途径快速活化,而后随病程推进凝血因子逐渐耗竭而诱发DIC;而病程发展中大量生成的FDP,也会干扰纤维蛋白多聚化造成出血倾向,加重DIC;同时脓毒症所导致的肝脏损伤引起AT-III表达减少,造成机体抗凝功能下降从而加剧DIC。

      • 1
    • WNK2通过抑制酪氨酸磷酸酶活性延缓肝细胞癌的增殖和侵袭

      武雪亮

      Abstract:

      摘要:目的 检测WNK2对肝细胞癌中SHP2(酪氨酸磷酸酶)表达的影响以及探讨对肝细胞癌细胞增殖和迁移能力的影响;方法 将WNK2-mimic和WNK2-inhibitor以及相应的阴性对照转染HepG2细胞,采用Balb/c裸鼠皮下成瘤实验检测WNK2对肝细胞癌增殖能力的影响;采用western blot检测瘤组织中WNK2、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达;使用SHP2抑制剂PHPS1进行处理之后,采用western blot检测HepG2细胞中WNK2、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达;使用细胞划痕实验和Transwell检测HepG2细胞的迁移能力和侵袭能力;采用单克隆增殖实验和CCK8检测HepG2细胞的增殖能力;结果 与NC组相比,sh-RNA WNK2组裸鼠的瘤体体积显著增大(p<0.01),而WNK2-mimic组裸鼠的瘤体体积显著减小(p<0.01);Western blot结果显示,与NC组相比,sh-RNA WNK2组WNK2的表达显著降低(p<0.01),p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达显著升高(p<0.01);而WNK2-mimic组WNK2的表达显著升高(p<0.01),p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达显著降低(p<0.01);在体外实验当中,相对于NC组,WNK2-inhibitor组中WNK2的表达显著降低(p<0.01),p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达显著升高(p<0.01);相对于NC PHPS1组,WNK2-inhibitor PHPS1组中WNK2的表达显著降低(p<0.01),而p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达则被逆转并且与NC PHPS1组没有显著性差异(p>0.05);细胞划痕实验和Transwell结果显示,相对于NC组,WNK2-inhibitor组HepG2细胞的迁移和侵袭能力显著升高(p<0.01);NC PHPS1组和WNK2-inhibitor PHPS1组HepG2细胞的迁移和侵袭能力显著降低并且没有显著性差异(p>0.05);单克隆增殖实验结果显示,相对于NC组,WNK2-inhibitor组HepG2细胞的增殖能力显著升高(p<0.01),而NC PHPS1组和WNK2-inhibitor PHPS1组HepG2细胞的增殖能力显著降低并且没有显著性差异(p>0.05)。

      • 1
    • IL2rg-/-基因敲除大鼠支持人RSV病毒的长期感染

      范昌发, 熊芮, 吴勇, 杨艳伟, 屈哲, 刘甦苏, 王誉雅, 马丽颖, 付瑞, 彭宜红, 梁春南

      Abstract:

      人类呼吸道合胞病毒 (human respiratory syncytial virus, hRSV)是引起全世界婴幼儿、老人及部分成人呼吸道疾病和死亡的主要病原体之一。动物模型在疫苗、治疗性药物评价中均发挥重要作用,包括黑猩猩等非人灵长类在内的多种动物均被用于构建hRSV的感染模型。但大多数动物模型的半受纳性特性及感染持续时间短等缺陷,阻碍了它们在 hRSV 发病机制和治疗开发中的应用。本文基于TALENs技术建立了IL2rg基因敲除的大鼠模型。 通过鼻内接种 hRSV 后,纯合的IL2rg敲除 (IL2rg?/?)大鼠的呼吸道内能保持较高的病毒载量,鼻腔中病毒的平均峰值滴度能快速升至 1?010 拷贝/g,至第5 周时,病毒依然能维持复制,病毒载量亦可达到 1?07拷贝/g。本文建立的可遗传的免疫缺陷大鼠模型,其性状稳定且易于生产,有利于疾病模型的标准化;较小鼠而言,大鼠具有体形较大、更利于采集足量临床样本的优势,该IL2rg?/?大鼠模型可用于hRSV传播和发病机制研究,是评估治疗方法的有用工具。

      • 1
    • 基于啮齿类动物粪菌移植临床前研究的方法学讨论

      孙诗琪, 刘路, 胡双元, 王雨岩, 孙铭声, 赵凌

      Abstract:

      粪菌移植(Fecal microbiota transplant, FMT) ,是一种以肠道微生物为靶向,通过将供体的粪便微生物移植到受体的胃肠道,以重构受体肠道菌群的治疗方式。但FMT应对不同疾病的作用机制及不良反应尚未明确,因而无法广泛应用于临床,仍需依赖临床前研究的深入。介于当前报道中实验细节高度不一致或不完整,加之缺乏权威的标准及建议,不仅严重影响了其研究结果的解释和实验过程的复制,同时阻碍了成果的临床转化。我们回顾并讨论了受体选择及移植样本收集、储存、移植材料制备、移植途径等关键步骤,以期能提高实验动物、耗材及劳动力等因素的利用率,为实现FMT临床前研究的可复制及标准化提供方法学建议与参考。

      • 1
    • 异丙肾上腺素诱导慢性心衰模型不同方案的比较

      谈宇权, 胡志希

      Abstract:

      目的:比较3种不同方案制备的动物模型,探索稳定、可靠且重复性好的小鼠慢性心力衰竭模型。方法:将25只雄性C57BL/6J小鼠随机分为四组,即空白组(ZC)、模型A组(MA)、B组(MB)和C组(MC)。模型组采取不同制备方案连续注射ISO,其中MA组和MB组为剂量递减造模法,MA组 (第1日10 mg·kg-1、第2日5 mg·kg-1 、第3~30日2.5 mg·kg-1·d-1;皮下注射30天);MB组 (第1日20 mg·kg-1、第2日10 mg·kg-1、第3~14日5 mg·kg-1·d-1;皮下注射14天)、MC组(剂量恒定7.5 mg·kg-1·d-1,腹腔注射28天),构建CHF模型。在注射结束后的第二天,计算各组小鼠存活率和成模率情况。通过心脏超声检测心功能,并用Elisa测定血清中N端前脑钠肽(N-Terminal Pro-Brain Natriuretic Peptide,NT-pro BNP)、白介素6(IL-6)以及肿瘤坏死因子(TNF-α)水平。结果:在第4周末注射结束后,各模型组虽然都能有效诱导CHF。但综合检测结果,发现7.5mg/kg浓度MC组的造模情况最稳定,更适合后续开展中医药的相关研究。结论:ISO制备小鼠CHF模型以恒定7.5 mg·kg-1·d-1,连续腹腔注射28 d为最佳方案。

      • 1
    • 鸽子在动物机器人领域的研究进展

      李蒙蒙, 杨龙, 杨莉芳, 万红, 尚志刚

      Abstract:

      鸽子具有集群和归巢习性,善于远途负重与持续飞行,导航和空间认知能力卓越,近年来被广泛应用于动物机器人研究。鸽子机器人通过对鸽子脑内特定的神经靶点施加神经信息干预以实现运动行为控制。本文根据鸽脑内的分层多级神经调控靶点分布,分别对基于感觉系统、动机和情绪系统或皮层以及中脑运动区的鸽子机器人研究进展进行分类综述,以期为进一步利用鸽子机器人开展空间感知、侦察勘测和反恐搜救等应用研究提供参考和指导。

      • 1
    • 白芷在神经病理性疼痛中对MrgprD-TRPA1通路的调控作用分析

      顾乐盈, 杨妞妞, 于康英, 孟雅琴, 宋绍征

      Abstract:

      目的 神经病理性疼痛是由中枢或周围神经系统受到损伤、功能障碍或短暂性紊乱而造成的一种慢性疼痛,其发生机制与一些受体相关,分析白芷在神经病理性疼痛中的镇痛效果及其对MrgprD-TRPA1信号通路的调控作用。 方法 首先,应用无菌外科手术结扎缠绕30只小鼠坐骨神经制备CCI小鼠模型;其次,应用VonFrey实验检测白芷对小鼠机械刺激疼痛行为学变化,热辐射实验评估白芷对小鼠热痛觉过敏情况;然后,分别应用 Western-blot、免疫荧光、RT-PCR检测白芷对小鼠MrgprD和TRPA1蛋白表达水平、DRG阳性神经元数量、MrgprD和TRPA1 mRNA水平的影响;最后,通过对HEK293细胞分别单转染和共转染MrgprD、TRPA1质粒后的钙成像实验,分析荧光信号强度差异性。 结果 共成功制备了25只CCI小鼠模型,造模率达到83.33%(25/30);CCI小鼠在第7 d后,机械性刺激阈值和热辐射缩足潜伏时间出现最显著差异,且达到最低值。白芷灌胃的CCI小鼠机械性阈值和缩足潜伏时间均显著大于纯水灌胃的CCI小鼠和未进行灌胃的CCI小鼠(P<0.05);白芷灌胃的CCI小鼠中MrgprD和TRPA1蛋白表达水平显著低于纯水灌胃后的CCI小鼠( 0.73±0.11 VS 2.69±0.23,0.42±0.09 VS 2.03±0.18,P<0.05);白芷灌胃的CCI小鼠DRG中MrgprD和TRPA1阳性神经元的数量显著低于纯水灌胃后的CCI小鼠( 654±47 VS 1162±63,P<0.05);白芷灌胃的CCI小鼠中MrgprD和TRPA1 mRNA相对表达水平均显著低于纯水灌胃的CCI小鼠和未进行灌胃的CCI小鼠(P<0.05);共转染MrgprD和TRPA1质粒的HEK293细胞中荧光强度显著高于单转染和空白对照(P<0.05)。结论 本研究通过结扎缠绕成功建立了小鼠CCI模型,探究白芷在CCI模型中镇痛的效果及其机制,证明了MrgprD-TRPA1是神经病理性疼痛的重要作用靶点,白芷可以通过调控MrgprD-TRPA1信号转导通路来抑制神经病理性疼痛程度,这为后续开发新型临床镇痛药物及镇痛机制的深入研究奠定了基础。

      • 1
    • 淫羊藿苷调控NLRP3炎症小体抗脑缺血再灌注机制

      曾奇, 吴雅晨, 刘明

      Abstract:

      目的:探讨淫羊藿苷治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的作用机制。 方法:采用线栓法制备局灶性脑缺血再灌注大鼠模型。术后24 h将大鼠随机分为假手术组,模型组,丁苯酞组(70 mg穔g-1),淫羊藿苷高、中、低剂量组(80、40、20 mg穔g-1),灌胃相应药物10 mL穔g-1,每天给药一次,连续给药13 d。末次给药1 h后进行神经功能评分,苏木素-伊红(HE)染色法对大鼠大脑皮层进行病理学观察,免疫组化法测定大鼠大脑皮层白介素-1β(IL-1β)、白介素-18(IL-18)表达,蛋白印迹免疫法(Western blot)测定大鼠大脑皮层NOD 样受体热蛋白结构域 3(NLRP3)、相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)蛋白表达。 结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分显著增加;缺血周围区大脑皮层可见神经元不同程度坏死或胶质细胞增生,完整神经元数量显著减少;IL-1β、IL-18阳性细胞表达明显升高;NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达显著增加(P<0.01,P<0.05)。经淫羊藿苷治疗后,大鼠神经功能评分明显降低;缺血周围区神经元坏死程度明显减轻,完整神经元数量显著增加;IL-1β、IL-18阳性细胞表达明显降低;NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达量显著下降(P<0.01,P<0.05)。 结论:淫羊藿苷治疗脑缺血再灌注损伤可能与调控NLRP3炎症小体有关。

      • 1
    • 抗阻运动对SAMP8小鼠骨骼肌lncRNA和mRNA基因表达谱的影响

      傅泽铤, 李仲豪, 李伦宇, 刘洪政, 丁海丽

      Abstract:

      【摘要】目的 利用RNA-seq技术比较运动组与对照组小鼠股四头肌中差异表达的lncRNA和mRNA,探讨抗阻运动作用于SAMP8小鼠(senescence accelerated-prone mouse)的潜在调控机制。方法: 12只28周龄雄性SAMP8快速衰老小鼠分为模型组(M组)、抗阻运动组(R组),每组6只;另设6只同龄SAMR1抗衰老小鼠(senescence accelerated resistant mouse)作对照组(C组)。抗阻运动组经递增负重爬梯运动训练8周。每一周测定相对抓力、每两周测转棒测试时间。取材后取右侧股四头肌进行 HE染色观察其组织学变化;并取左侧股四头肌进行RNA-seq(RNA-sequencing),筛选出差异表达的lncRNA(long non-coding RNA, lncRNA)和mRNA,然后对这些基因进行基因本体(Gene Ontology, GO)和京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)富集分析。最后通过定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)对关键性差异表达基因进行定量分析以验证RNA-seq结果的准确性。结果:(1)干预前,SAMP8小鼠相比较于自然衰老的SAMR1小鼠表现出相对抓力以及加速转棒测试时长显著下降(P<0.01);干预后,与M组相比,R组相对抓力以及转棒时长均出现显著增加(P<0.01)。(2) HE染色结果显示,M组肌纤维横截面积与C组比较显著下降(P<0.01);R组肌纤维横截面积与M组比较显著增加(P<0.01)。(3)通过差异表达分析,相比于M组,R组有182个表达水平上调和218个表达下调的lncRNAs以及454个表达上调和289个表达下调的mRNAs。R组与M组之间差异lncRNA的靶基因的KEGG显著富集的通路有产生IgA的肠道免疫网络、NF-kappa B、炎症性肠病等信号通路。结论:(1) 本研究证明了抗阻运动能够改善SAMP8小鼠肌少症的骨骼肌机能,利用RNA-seq 分别鉴定出M组、R组小鼠的差异 lncRNAs和mRNAs。这些差异基因可能是肌少症的潜在治疗靶点。(2)通过分析差异表达lncRNAs的靶基因以及mRNAs的生物学信息,从而为进一步了解抗阻运动改善肌少症的机制提供了可能。

      • 1
    • 特发性肺纤维化实验模型研究进展

      李智慧, 余学庆, 杨曙光, 于宁霞, 臧丹阳

      Abstract:

      特发性肺纤维化(IPF)是一种慢性、进行性间质性肺疾病,发病率逐年上升,死亡率高,预后极差。目前,IPF发病机制仍不明确,治疗措施有限。实验模型是深入研究IPF发病机制和探索有效防治措施的关键工具,近年来其造模方式已得到不断的发展和优化,鉴于此,本研究对近年来IPF实验模型的构建方法和研究进展进行总结,以期为临床前研究选择合适实验模型提供思路和参考。

      • 1
    • 转基因小鼠源性胰腺癌原位移植瘤模型的构建与评价

      安庆玲, 谭邓旭, 赵亚, 张彩勤, 师长宏

      Abstract:

      目的 构建转基因LSL-KrasG12D/+,LSL-Trp53R172 H/ +,Pdx1-Cre(KPC)小鼠胰腺癌原位移植瘤模型,为研究胰腺癌的发展机制和治疗策略提供稳定、可靠的临床前动物模型。方法 将KPC转基因小鼠的自发胰腺癌的组织块进行C57BL/6J小鼠胰腺原位移植,利用超声进行无创非侵入肿瘤监测,对原发肿瘤和传代肿瘤进行H E染色和免疫荧光染色评价模型的肿瘤病理学特征。结果 KPC小鼠的自发肿瘤能够在C57BL/6J小鼠的胰腺上稳定生长,肿瘤增殖指标Ki67、基质纤维化标志物αSMA、免疫细胞标志物CD45和CD206均稳定表达,该模型能够稳定地保留原发胰腺癌病理学特征,并发生与临床胰腺癌患者相似的广泛转移。结论 成功建立转基因小鼠源性胰腺癌原位移植瘤模型,该模型能够模拟出胰腺癌的基质环境和免疫细胞浸润情况,具有较好的稳定性和均一性,可以作为研究胰腺癌进展和治疗策略的有效临床前模型。

      • 1
    • 基于TRL4/MyD88/NF-κB通路探讨美洲大蠊虫粉对脊髓损伤大鼠的保护作用

      李杰, 周邦瑜, 马彦博, 阮玉山, 李绍波

      Abstract:

      目的 探讨美洲大蠊虫粉对脊髓损伤大鼠的保护作用和可能的机制。方法 将48只SD大鼠随机分为假手术组、盐水组、美洲大蠊虫粉组、TOLL样受体4(Toll-like receptors,TLR4)抑制剂组。除假手术组外其余三组均构建大鼠脊髓半横断损伤模型。术后假手术组不做治疗,盐水组与美洲大蠊虫粉组分别给予生理盐水和美洲大蠊虫粉(630 mg/kg)灌胃处理,TLR4抑制剂组给予TLR4抑制剂(3 mg/kg)腹腔注射处理。术后1 d、3 d、7 d、14 d运用BBB评分评估大鼠后肢运动功能,苏木素-伊红(HE)染色观察脊髓组织病理改变,免疫组化观察神经元数目变化,酶联免疫法检测炎性因子IL-1、IL-6、IL-10和TNF-α表达, Western Blot检测TLR4、髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88,MyD88)和NF-κB p65表达。结果 与假手术组相比,盐水组BBB评分、神经元数目显著下降,而病理损伤程度、IL-1、IL-6、TNF-α,TLR4,MyD88,NF-κB p65水平显著增加(P < 0.05),与盐水组相比,美洲大蠊虫粉组和TLR4抑制剂组增加了BBB评分、神经元数目、降低了病理损伤程度、IL-1、IL-6、TNF-α,TLR4,MyD88,NF-κB p65水平(P<0.05),与TLR4抑制剂组相比,美洲大蠊虫粉组更好的增加了BBB评分、神经元数目,降低病理损伤程度、IL-1、TNF-α表达。结论 美洲大蠊虫粉可以通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路减少脊髓损伤后炎性因子的产生,起到保护神经和促进运动恢复的作用。

      • 1
    • BAPN诱导小鼠胸主动脉夹层合并急性肺损伤模型的建立

      买志妍, 江丽青, 朱翰朝, 张溧昀, 王云, 段维勋

      Abstract:

      【摘要】 目的 采用β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile monfumarate,BAPN, 1g/kg/d)饮水给药的方式,构建一种可行性高、稳定的胸主动脉夹层(Thoracic aortic dissection,TAD)合并急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)的小鼠模型,为研究TAD合并ALI提供合理的平台。 方法 选取45只SPF级3周龄C57BL/6J雄性小鼠,随机分为CON组15只(正常饮食水)和BAPN组30只(与无菌水配置成1g/kg/d的溶液饮水给药),持续4周。实验期间,观察两组小鼠一般情况、成模率,通过测量小鼠升主动脉最大直径和主动脉组织H&E染色,验证小鼠TAD模型并将BAPN组分为TAD组和Non-TAD组。进一步检测CON组、Non-TAD组和TAD组小鼠肺组织H&E病理染色、湿干重比(dry/wet weight ratio,W/D)及肺泡灌洗液(Broncho alveolar lavage fluid,BALF)中总蛋白水平和白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达情况验证小鼠TAD合并ALI模型。 结果 BAPN干预明显延缓小鼠的体质量和饮水量的增加。与CON组和Non-TAD组相比,TAD组小鼠升主动脉最大直径明显增粗(P<0.05);主动脉H&E染色示主动脉壁明显增厚,平滑肌细胞减少,弹性纤维断裂、无序;肺组织H&E染色显示肺间质明显水肿及炎性渗出,伴肺泡壁增厚、肺泡腔扩大,肺损伤病理评分显著增加(P<0.05);肺组织W/D、BALF中总蛋白水平及IL-1β、IL-6、TNF-α表达也明显升高(P<0.05),而另外两组上述指标无明显差异。 结论 通过BAPN饮水给药的方式,可成功建立胸主动脉夹层合并急性肺损伤的小鼠模型。

      • 1
    • 核定位人源α-突触核蛋白转基因小鼠的建立

      韦梦晨

      Abstract:

      【摘要】 目的 建立一种核定位人源α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)转基因小鼠,并探究人源α-syn核输入对小鼠行为的影响。方法 构建hSNCA-NLS和EGFP的慢病毒载体,利用显微注射法建立转基因小鼠模型,通过 PCR 和Western blotting方法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型和蛋白表达情况。 采用免疫荧光鉴定人源α-syn在小鼠脑组织中的共定位情况,同时采用旷场、转棒、 O迷宫实验评价转基因小鼠的行为改变情况。结果 成功构建了核定位人源α-syn转基因小鼠,人源α-syn在小鼠各个组织中广泛表达,并且有明显的核定位现象。进一步研究发现,核定位人源α-syn转基因小鼠在2月龄时开始表现出了运动功能障碍,发生了星形胶质细胞增生和炎症反应,于9月龄时表现出了明显的焦虑样症状,γ-氨基丁酸(GABA)基因表达减少,这些表现一直持续到小鼠12月龄。结论 成功构建了核定位人源α-syn转基因小鼠,人源α-syn在小鼠各个组织中广泛表达,并且有明显的核定位现象。小鼠表现出明显的运动功能障碍和焦虑样症状。该模型的成功建立可以为研究α-syn核定位现象在帕金森病中的作用提供一定的研究基础。

      • 1
    • 复合因素诱导射血分数保留心力衰竭大鼠模型的建立及评价

      石玉姣, 杨晨光, 乔文博, 刘永成, 刘思雨, 董国菊

      Abstract:

      【摘要】 目的 通过复合因素建立射血分数保留心力衰竭(HFpEF)大鼠模型,评估其特征,并探讨心肌应变参数与心肌肥厚及纤维化的相关性。方法 8只WKY大鼠和8只自发性高血压大鼠(SHR)作为对照组,给予普通饲料至实验结束。32只SHR大鼠平均分SHR+S组、SHR+F组、SHR+SF组及SHR+复合组分别给予高盐饲料、高脂饲料、高盐-脂饲料、高盐-脂?糖饲料联合腹腔注射链脲霉素30周。造模结束后,测量心重/体重(HW/BW)、收缩压(SBP)及舒张压(DBP);行超声心动图测量左心室(LV)舒张末内径(LVIDd)、LV前壁厚度(LVAWd)、LV后壁厚度(LVPWd)、LV射血分数(LVEF)、等容舒张时间(IVRT)、LV舒张早期二尖瓣流入峰值速度(E)/二尖瓣环运动速度(e');斑点追踪超声心动图测量全纵向应变(GLS)及应变率(GLSr)、全径向应变(GRS)及应变率(GRSr)、全周向应变(GCS)及应变率(GCSr);血清学检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、葡萄糖(GLU)及糖化血清蛋白(GSP),ELISA法检测血清B型利钠肽(BNP)、血管紧张素II(AngII)及半乳糖凝集素3(Gal-3);心肌进行HE及Masson染色观察心肌细胞及纤维化,并计算心肌细胞横截面面积(CSA)及胶原体积分数(CVF);此外,分析心肌应变参数和CSA及CVF的相关性。结果 与对照组比较,各模型组,尤其是SHR+复合组的HW/BW、SBP、DBP、血清指标(TC、TG、LDL-C、GLU、GSP、BNP、AngII及Gal-3)和超声心动图参数(LVIDd、LVAWd、LVPWd、IVRT及E/e)显著上调;斑点追踪超声心动图参数GLS、GLSr、GRS、GRSr、GCS及GCSr的绝对值显著下降;心肌组织HE及Masson染色提示明显心肌细胞肥大及纤维化,并且CSA及CVF显著增加(P<0.01或0.05)。相关性分析显示,GLSr、GCS及GCSr与CSA密切相关;GLS、GLSr和GCSr与CVF密切相关(P<0.01)。结论 本研究模拟高血压及糖脂代谢紊乱诱导的HFpEF大鼠模型在病因、临床表现及心肌病理改变上复刻了HFpEF的基本特征,可能是代谢综合征相关HFpEF的可靠动物模型。此外,心肌应变参数与心肌肥厚及纤维化密切相关,可能间接反应心肌细微病变和功能障碍。

      • 1
    • 芩蓟凉血合剂对痔病相近动物模型的影响

      周蒙恩, 李鹏, 金文琪, 王若琳, 郭修田

      Abstract:

      目的 探讨芩蓟凉血合剂(QLM)对痔病相近动物模型的影响。方法 分别使用巴豆油制剂(COP)、冰醋酸制备大鼠急性痔病动物模型,将80只SD雌性大鼠,随机分为对照组,模型组,QLM低剂量组(QLM-L),QLM高剂量组(QLM-H),地奥司明组(DOSM),每组8只,除对照组,其余组均使用COP或冰醋酸处理,随后使用不同药物治疗7天。使用HE染色观察COP及冰醋酸诱导的肛门直肠组织形态学,使用ELISA检测COP诱导的大鼠血清IL-8、TNF-α水平,记录冰醋酸诱导的大鼠肛周溃疡面积。将24只C57小鼠随机分为对照组,QLM-L组,QLM-H组,肾上腺色腙片组(CT),每组6只,连续治疗7天,使用毛细管法及断尾法评价QLM的止血疗效。结果 QLM能够显著改善痔病相近动物模型的病理损伤,减轻COP诱导的病变程度评分(P<0.05),降低血清TNF-α、IL-8水平(P<0.05),减少冰醋酸诱导的肛周溃疡面积(P<0.05),缩短凝血及出血时间(P<0.05)。结论 QLM具有良好的抗痔活性,其作用可能是通过抗炎、止血、减少组织损伤实现的。

      • 1
    • 运动调节Nrf2/HO-1通路改善HFFC膳食诱导肝细胞氧化应激的作用研究

      平烨, 张珮雯, 袁馨梦, 项梦奇, 杨梦凡, 林小霞, 董诗茹, 刘宇婷, 张媛

      Abstract:

      目的 探究自主跑轮运动能否调控Nrf2/HO-1通路影响肝脏氧化应激从而缓解HFFC膳食诱导的肝脏脂质沉积。 方法 将8周龄C57BL/6J小鼠适应性饲养1周后随机分为普通饮食组(NC组,n=10)和高脂肪、果糖和胆固醇饮食组(HFFC组,n=20)。饲养10周后将HFFC组分为安静组(HFFC组,n=10)和HFFC结合运动干预组(HFFC+EX组,n=10)。HFFC+EX组小鼠笼中装有自主跑轮供其自由活动,每天记录跑轮圈数,连续8周。末次干预结束后间隔24小时禁食12小时处死小鼠,取血液和肝脏进行检测。 结果 (1) HFFC饮食诱导小鼠的体重、肝重及肝指数显著高于NC组,运动干预后显著降低(P < 0.05);(2) 与NC组相比,HFFC组小鼠HDL-C和LDL-C显著升高,运动干预8周后LDL-C水平显著降低(P < 0.05);(3) HFFC组小鼠肝脏脂滴面积及肝脏TG含量显著高于NC组,而HFFC+EX组显著减少(P < 0.05);(4) 与NC组相比,HFFC组小鼠氧化酶MDA含量和HO-1表达水平显著上升,Nrf2入核及基因表达显著减少,运动干预后SOD和T-AOC活性明显下降,Nrf2入核及基因表达、HO-1和SOD-1的表达水平显著升高(P < 0.05);(5) HFFC饮食组小鼠肝细胞凋亡数及CHOP表达水平较NC组显著增加,运动组肝细胞凋亡数、CHOP和Bax/Bcl-2表达水平显著下降(P < 0.05)。 结论 自主跑轮运动可通过调节Nrf2/HO-1通路减轻HFFC膳食诱导的肝脏脂质沉积,从而缓解肝脏细胞氧化应激状态,减少细胞凋亡。

      • 1
    • 腹泻型肠易激综合征动物模型评价的研究进展

      张佳河, 祝旺, 沈丹婷, 杨希玲, 刘凤斌, 侯秋科

      Abstract:

      肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)是常见的功能性肠病之一,其中腹泻型肠易激综合征(diarrhea-predominant IBS,IBS-D)占比最多,发病机制复杂多样,且缺少临床特效药。动物模型的制备是进一步研究疾病机制、评价临床药效以及药物开发的重要基础,而模型制备和评价标准关乎研究的质量。本文通过查阅国内外文献及结合本课题组的前期建模经验,基于IBS-D目前公认的发病机制出发,从腹泻情况观察,内脏敏感性测定,肠道动力测定等方面系统总结IBS-D动物模型的评价方法,以期为今后研究提供参考。

      • 1
    • 基于物理方法的皮肤创伤动物模型构建及评价指标研究进展

      欧雪, 余志杰, 何瑶, 郑晓媛

      Abstract:

      皮肤创伤已成为全球性公共问题,尤其是慢性伤口的难愈合严重影响了患者的健康生活。目前,物理方法构建皮肤创伤动物模型是研究皮肤创面的主要方法,而不同的皮肤创伤动物模型其生物学特点不同。因此,本文通过检索Pubmed、中国知网数据库近5年与皮肤创伤动物模型构建的相关资料,以小鼠、大鼠、其他动物的皮肤创伤模型进行分类,总结并分析了基于物理方法的皮肤创伤动物模型的构建方法及评价指标,并评价不同动物模型的优缺点,旨在对皮肤创伤动物模型的合理构建及药物的研究开发提供思路。

      • 1
    • 小鼠血液中年龄相关的DNA甲基化微单倍型的筛选与验证

      田艺博, 吴雨静, 肖君华, 周宇荀, 李凯

      Abstract:

      目的 DNA甲基化微单倍型(DNA methylation microhaplotype,DMH)指极短范围内多个甲基化位点的组合,其单倍型具有丰富的多样性。筛选和验证小鼠血液中年龄相关的DNA甲基化微单倍型。方法 首先,构建基于小鼠参考基因组的DNA甲基化微单倍型理论数据集。其次,利用网络数据库中小鼠血液DNA甲基化高通量测序信息,采用Spearman秩相关分析方法筛选年龄相关的DNA甲基化微单倍型。最后,以验证数据集交叉验证。结果 小鼠基因组中50 bp范围内的DNA甲基化微单倍型位点数量共计6,787,142个,由个位数的CpG位点所组成的DNA甲基化微单倍型占比98.64 %。在58个小鼠血液样本中共筛选出5835个年龄相关的DNA甲基化微单倍型(Spearman秩相关检验,|rho| > 0.5,P < 0.01),它们在DNA甲基化微单倍型中占比0.086 %。 最后,在95例独立的样本中对具有高相关性的前一百个年龄相关的DNA甲基化微单倍型进行验证,最终得到44个位点。结论 本研究筛选出的年龄相关的DNA甲基化微单倍型可以为以后的小鼠血液表观年龄预测及衰老研究提供借鉴。

      • 1
    • 基于中西医临床病症特点的眩晕动物模型分析

      李亚青, 汪小毅, 王灿, 苗明三

      Abstract:

      目的 基于眩晕的中西医临床病症特点,对其现有动物模型进行分类分析,评估模型的临床吻合情况及其优缺点,以期改进现有的动物模型、为临床研究提供更直观的参考。方法 检索数据库中现有的眩晕动物模型资料,根据造模方法进行分类、结合眩晕的中西医临床病症特点和现有的动物模型评价方法,对各模型进行赋值,评估其临床吻合情况、评价模型优缺点。结果 现有的眩晕动物模型有颈部手术模型、运动刺激模型、耳源性刺激模型、硬化剂注射模型、飞行变压模型、椎动脉结扎模型、瘀血注射模型;其中,西医吻合度较高(吻合度≥60%)的是颈部手术模型(65%)、耳源刺激模型(65%),所有模型中医吻合度均中等(50%≤吻合度<60%)或较低(吻合度<50%),没有中、西医吻合度同时较高的模型。结论 目前眩晕动物模型以西医疾病模型为主,缺乏中医证型模型,中、西医临床吻合度均较高的模型较少,未能突出中医药辨证论治的特色。因此,构建出与中西医临床病症特点紧密结合的眩晕动物模型,可为抗眩晕新药的研发、筛选、临床评价提供更合理更全面的实验支撑。

      • 1
    • 小鼠甲状腺功能减退模型:两种术式的对比

      兰浩淼, 车红缨, 张立, 毛雨, 谢林浚

      Abstract:

      目的 甲状腺功能减退对于机体是一种严重的内分泌疾病,且是全身多个系统疾病的独立风险因素,对于甲状腺功能减退的研究离不开动物模型的建立,C57BL/6和昆明(KunMing, KM)小鼠是研究内分泌等多种疾病的理想动物载体,但目前详细描述小鼠甲状腺全切造模的研究较少。方法 本研究采用C57BL/6和KM小鼠进行结扎法(术式I)和止血法(术式II)进行甲状腺全切操作,并记录操作详细过程,利用酶联免疫吸附法检测、对比术前及术后小鼠的血清TT3、TT4及TSH水平、体重及颈部组织HE染色验证模型。结果 两种术式均造成两种属模型组小鼠血清TT3、TT4降低(P<0.05),TSH升高(P<0.001)。术式I和术式II组小鼠术后28天内存活率分别为C57BL/6小鼠:40%和60%;KM小鼠:50%和40%。两种属手术组小鼠术后体重较假手术组均明显升高。HE染色和显微镜观察结果表明,两种属小鼠颈部切取组织为甲状腺组织,且离体后甲状腺后背膜完整。结论 两种手术方式均能造成两种属小鼠甲状腺功能减退,但需要熟悉小鼠甲状腺及周围组织解剖关系,提高操作熟练度,预防术后低钙及感染从而提高造模后小鼠存活率。

      • 1
    • 人脐带间充质干细胞在小鼠组织中的分析方法学及其单次静脉注射NOG小鼠组织分布研究

      陈国玉, 潘若浪, 叶志超, 史煜华, 顾利强, 夏丽娟, 林晓波, 张强, 徐莎莎, 邵金金, 张立将

      Abstract:

      目的 建立并验证小鼠组织中人源SRY基因DNA定量PCR分析方法学,研究人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)单次静脉注射后在重度免疫缺陷NOG小鼠体内的组织分布情况。 方法 建立小鼠组织中人源SRY基因DNA的定量PCR分析方法,进行标准曲线与线性范围、准确度与精密度、稳定性等方法学验证。选取NOG小鼠36只,雌雄各半,单次静脉注射给予HUCMSCs 3.5?07 cells/kg,于6 h、12 h、24 h、72 h、1 w、2 w各取6只小鼠麻醉,采集血液(EDTA抗凝)后解剖,取肺脏、肾脏、心脏、肝脏、大脑、脊髓、胃、小肠、脂肪、皮肤、脾脏、睾丸(子宫、卵巢)提取DNA,用已验证的小鼠组织中人源SRY基因DNA定量PCR分析方法测定各组织中HUCMSCs的分布情况。另选取NOG小鼠18只,雌雄各半,分为的对照组6只、给药组12只,分别静脉注射0.9%氯化钠注射液、HUCMSCs 3.5?07 cells/kg,给药期间观察小鼠急性毒性反应情况,给药组于给药后72 h、2 w、4 w各取4只动物剖检观察脏器组织大体观情况,取肺组织石蜡切片采用免疫组化法检测线粒体蛋白表达,分析HUCMSCs在肺组织中的定植情况。 结果 建立的小鼠组织中人源SRY基因DNA的定量PCR分析方法各考察指标均符合验证标准;NOG小鼠单次静脉注射HUCMSCs后,主要分布于肺脏和血液中(给药后1 w内),肺组织浓度高于血液,肺组织、血液中HUCMSCs浓度分别在6 h~24 h、6 h~72 h之内维持相对平稳水平,后随时间推移下降,其他组织各采样点均未测得HUCMSCs分布;定植结果显示静脉注射HUCMSCs后72 h可在肺部检测到其存在,2 w和4 w时则未检测到;单次静脉注射HUCMSCs后NOG小鼠未见明显急性毒性反应。 结论 建立的HUCMSCs小鼠组织中分布分析方法可靠、可行; NOG小鼠单次静脉注射HUCMSCs后主要于给药后1 w内分布于肺和血液,72 h主要定植于肺组织;单次静脉注射HUCMSCs具有良好的安全性。

      • 1
    • 博来霉素诱导的肺纤维化动物模型研究进展

      王搏, 宋庆华, 唐会猛, 刘杨, 谢洋, 田燕歌

      Abstract:

      肺纤维化(pulmonary fibrosis, PF)是一种进行性、间质纤维化性肺疾病,其特征是肺实质的持续瘢痕形成,患者生存质量降低、预后不良。PF发病机制不明,缺乏有效治疗药物,动物模型是探讨疾病发病机制、寻求有效治疗药物的主要工具。多种因素可诱导纤维化形成,根据已知病因(粉尘、辐射、细菌或病毒等)可不同程度诱导PF模型,其中,博来霉素(bleomycin, BLM)诱导的模型具有重复性强、纤维化病理与临床类似等优势而被广泛应用,其诱导方式主要有气管内滴注、气管内雾化、尾静脉注射、腹腔注射和经鼻吸入,根据诱导频次分为单次和多次诱导。本文基于相关文献,总结了BLM不同诱导频次、诱导方式建立的PF模型的特点,为该模型的应用提供依据。

      • 1
    • 基于16S rRNA测序技术研究口服益生菌对结肠癌皮下瘤小鼠肠道菌群结构的影响

      张树玲, 王军威, 左鲁玉, 胡世亮, 孙君志, 王纯

      Abstract:

      目的 基于16S rRNA测序技术探讨口服益生菌对结肠癌皮下荷瘤小鼠肠道菌群多样性、群落结构及组间差异的影响。方法 24只6周龄BALB/c雄性小鼠,适应性喂养1周后,随机分为对照组(NC组,n = 8),模型组(M组,n = 8),益生菌+模型组(PM组,n = 8)。PM组采用灌胃200 μL益生菌混合溶液(长双歧杆菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种混合冻干粉,2 × 108CFU),NC组、M组则给予200 μL生理盐水,每周3次,连续7周。于10周龄末,M组和PM组左后肢侧背部皮下接种0.2 mL CT26.WT细胞悬液(浓度为1 × 10 7/mL),NC组相同部位接种0.2 mL生理盐水。观察小鼠一般状态、监测皮下肿瘤生长情况,利用16S rRNA测序法检测肠道菌群结构的变化。结果 M组小鼠皮下瘤凸显,PM组小鼠皮下瘤体积与重量显著减少(P<0.05)。与NC组相比,M组小鼠肠道菌群Alpha多样性指数降低,组间Beta多样性存在显著差异性(P<0.01),补充益生菌对M组小鼠肠道菌群结构多样性具有一定的回调作用。与M组相比,PM组拟杆菌门(Bacteroidetes)、变形菌门(Proteobacteria)、Muribaculaceae、拟杆菌属(Bacteroides)等相对丰度升高,厚壁菌门(Firmicutes)、脱硫菌门(Desulfobacterota)、毛螺菌属(Lachnospiraceae_NK4A136_group)、另枝菌属(Alistipes)等相对丰度降低。LEfSe分析表明,PM组Muribaculaceae、拟杆菌属(Bacteroides)为丰度较高的差异物种(LDA值>4)。结论 口服益生菌可能通过增加结肠癌皮下瘤小鼠肠道菌群中有益菌Muribaculaceae和拟杆菌属(Bacteroides)的相对丰度,进而改善肠道菌群失调状态。

      • 1
    • 5XFAD转基因小鼠在阿尔茨海默病研究中的应用进展

      刘怡端, 叶田园

      Abstract:

      5×FAD小鼠(Transgenic mice with five familial Alzheimer’s disease)是携带5个家族性基因突变的APP/PS1转基因小鼠,其中与β-淀粉样蛋白前体(amyloid precursor protein,APP)相关的突变为K670N/M671L(Swedish)、1716V(Florida)和V7171(London),与早老素-1(presenilin 1,PS1)相关的突变为MI46L和L286。5×FAD小鼠在1.5月龄时脑内已有大量的β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ),2月龄时开始出现神经炎性斑(neuritic plaque,NP)。5×FAD小鼠的病理表型包括淀粉样斑块聚集、神经元丢失、神经胶质细胞增生和记忆功能障碍等。5×FAD小鼠的生物学特性可能涉及脑内Aβ斑块的形成变化、Tau蛋白过度磷酸化、突触功能障碍、神经炎症反应、线粒体功能障碍、血脑屏障损伤、神经元损伤、内质网应激和眼部病变等。作为阿尔茨海默病的经典动物模型,5×FAD转基因小鼠在早期即可模拟AD患者晚期的神经病理过程及行为学表现,被广泛应用于AD发病机制研究和AD新药开发。本文对5×FAD转基因小鼠模型的模型构建、生物学背景、生物学特性及AD防治药物的研发应用进行总结和评述,以期为5×FAD转基因小鼠在AD研究中的应用提供参考与借鉴作用。

      • 1
    • 不同灭菌方法对猪专用配方奶粉营养成分的影响

      郭亚茜, 刘瑞雪, 杜晓鹏, 朱华

      Abstract:

      【摘要】 目的 使用不同灭菌方式对猪专用配方奶粉进行灭菌,探讨对配方奶粉营养成分损失最小的灭菌方法及灭菌条件。方法 猪专用配方奶粉分为高压灭菌组和辐照灭菌组。高压灭菌组按照不同灭菌条件、辐照灭菌组按照不同60Co-γ射线剂量对配方奶粉进行灭菌。按国标对灭菌处理后的配方奶粉进行无菌状态检测和营养成分含量测定。结果 经不同灭菌方法处理后各组配方奶粉无菌状态检测结果均为阴性。常规营养成分在高压灭菌组121℃ 30 min、辐照灭菌液体组50 kGy灭菌条件下粗蛋白含量降低有极显著性差异(P < 0.01)、辐照灭菌粉末组50 kGy水分、粗蛋白和钙含量降低有极其显著性差异(P < 0.001)。缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸在辐照灭菌粉末组50 kGy灭菌条件下含量变化无显著性差异,高压灭菌组和辐照灭菌液体组所有氨基酸含量均降低(P < 0.001)。微量元素在高压灭菌组121℃ 30 min灭菌条件下铁含量增加(P < 0.001),在辐照灭菌液体组25 kGy灭菌条件下铁和钾含量增加(P < 0.001),镁含量增加(P < 0.01)。在辐照灭菌粉末组50 kGy灭菌条件下镁含量增加有显著性差异(P < 0.05),钠含量增加(P < 0.01)。维生素在高压灭菌组121℃ 30 min灭菌条件下VE、VB2含量增加(P < 0.001)。在辐照灭菌液体组50 kGy灭菌条件下VE含量增加(P < 0.05),VB2含量减少(P < 0.001)。在辐照灭菌粉末组25 kGy灭菌条件下VE、VA含量减少(P < 0.001)。结论 高压灭菌组121℃ 30 min营养成分损失最小;辐照灭菌组50 kGy辐照剂量营养成分损失最小。两种灭菌方法比较,50 kGy辐照灭菌粉末组营养成分含量损失最少。

      • 1
    • 猪作为模式动物在生物学方面的研究进展

      王妍, 邢凯, 曹永春

      Abstract:

      人类疾病动物模型是指生物医学研究过程中所建立起来的具有人类疾病模拟表现的动物实验对象及相关实验材料,在医学研究中有着至关重要的作用。猪与人类在解剖结构、生理学、免疫学和基因组学等方面具有相似性,作为模式动物非常适合于生物医学方面的研究,并且对比其他模式动物有较大优势。近年来,基因工程等生物技术的进步促进了用于人类疾病研究的猪模型的快速兴起。目前,猪除了作为异种移植器官供体与药物设计的工具外,还可以作为模式动物研究人类发育过程、先天性疾病和疾病反应机制,为改善人类健康作出巨大的贡献。本文将阐述猪作为人类研究模型心血管疾病、癌症、眼科学、颅面研究、肌肉骨骼研究、皮肤研究、生殖和胎儿发育、营养和微生物组研究、大脑和神经退行性疾病、糖尿病、感染性疾病和疫苗设计、以及异种移植的发展现状并对其未来应用进行展望。

      • 1
    • 双侧卵巢切除术和他莫昔芬给药诱发的潮热模型大鼠证候评价

      谢海纳, 潘志强

      Abstract:

      摘要:目的:探索用于妇女潮热现象研究的证候动物模型。方法:24只雌性SD大鼠随机分为假手术组、双侧卵巢切除组和他莫昔芬组三组,每组8只,分别采用双侧卵巢切除术和灌胃10 mg/kg/d他莫昔芬复制两种潮热动物模型。在造模第14天和28天,检测大鼠旷场活动、肛温、体表红外热像图等表征信息。第29天处死大鼠,取子宫称重并制作病理切片;ELISA检测血液雌二醇与肾上腺素含量;RT-qPCR检测肾上腺性激素合成酶(Star、Cyp11a1、Cyp17a1、Cyp19a1、Por、Hsd3b2、Hsd17b1)基因表达,肾上腺髓质儿茶酚胺物质合成酶(Th、Ddc、Dbh、Pnmt)基因表达。结果:与假手术组比较,双侧卵巢切除组大鼠体重增长显著(P<0.01),而他莫昔芬组大鼠体重增长缓慢。双侧卵巢切除组大鼠体表最高温度在第28天显著下降(P<0.01),而其腹部最高温度与最低温度之差在第14天显著升高(P<0.05)、背部最高温度与最低温度之差在第28天显著升高(P<0.01),且大鼠旷场活动度下降(P<0.01);他莫昔芬组大鼠给药14天其体表最高温度显著下降(P<0.01),但大鼠旷场活动度上升(P<0.01)。两种造模方式均导致大鼠子宫指数均呈明显下降(P<0.01)。与假手术组相比,双侧卵巢切除组和他莫昔芬组E2均显著下降(P<0.01),NE、Epi均呈降低趋势(P<0.05),双侧卵巢切除组β-EP也明显下降(P<0.05);与假手术组比较,双侧卵巢切除大鼠肾上腺Cyp11a1基因表达显著上升(P<0.05),而Cyp17a1与Hsd17b1基因表达显著下降(P<0.05);他莫昔芬组Star与Por基因表达显著上升(P<0.01),而Cyp17a1基因表达量明显下降(P<0.01);双侧卵巢切除组Pnmt基因表达显著下调(P<0.01)。结论:双侧卵巢切除大鼠可以用于围绝经期潮热的研究,其证候特征类似于中医的肾阳不足与阴虚内热。

      • 1
    • C57BL/6N-Tg(1.28HBV)/Vst乙肝病毒转基因小鼠的转录组学分析

      李容容, 孙鑫, 黄恺, 赵志敏, 彭渊, 刘成海

      Abstract:

      【摘要】 目的 观察C57BL/6N-Tg (1.28mer HBV) /Vst乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)转基因(HBV-Tg)小鼠模型的特征,并分析HBV-Tg小鼠模型的转录组学特点。方法 以10只雄性HBV-Tg小鼠作实验组,10只野生型小鼠作对照组。以血清HBV DNA、HBsAg、HBeAg水平和肝组织HBsAg、HBcAg表达情况评价模型小鼠病毒学特征,检测血清ALT、AST,肝组织HE、天狼猩红染色及肝组织 Hyp 含量评估小鼠肝脏炎症及纤维化程度。两组各随机选择3例肝组织样本提取RNA进行高通量转录组测序。经R软件分析获得表达显著的差异基因,经GO和KEGG分析获得差异基因功能富集情况,再采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR) 对差异显著的基因进行验证。 结果 与正常组比较,模型组ALT、AST水平均有所升高,以ALT更为显著(P < 0.05);模型组肝组织HE染色可见肝细胞核增大,个别肝细胞出现肿胀。天狼猩红染色结果显示,HBV转基因组汇管区及小叶间出现少量胶原沉积,呈细线状。通过筛选条件(logFC>2倍且P < 0.05)获得差异基因共计1352个,其中上调基因703个,下调基因649个。KEGG分析提示差异基因主要在PPAR信号通路、视黄醇代谢、脂肪酸降解等通路中富集(P < 0.05)。明显上调的差异基因主要有Cyp4a10、Cyp4a14、Acot1、Acot3、Ehhadh等,明显下调基因包括Adh4、dnajb11、hspa5、scn5a、apol10b等,经qRT-PCR验证趋势一致(P < 0.05)。 结论 HBV-Tg小鼠具有自发纤维化的趋势,经转录组学分析,CHB发生的潜在机制主要涉及PPAR信号通路、视黄醇代谢、脂肪酸降解、药物代谢等通路。

      • 1
    • 啮齿类动物衰老模型研究新进展

      李雪婵, 韩乐, 王雪文, 柳立军, 王晶

      Abstract:

      衰老是一种随着时间积累而发生的退行性变化的过程,年龄相关疾病与衰老密切相关。目前,探索衰老发生发展的原因和机制,寻找能有效延缓衰老、预防或治疗衰老疾病的药物,是人类面临的巨大挑战。衰老动物模型的构建是衰老研究必须涉及的重要手段。各种衰老动物模型都有不同的衰老机制,不同的衰老动物模型各有优缺点,适合不同的研究目的。本文以啮齿类动物所构建的衰老模型进行综述,为衰老研究提供资料。

      • 1
    • 长春瑞滨诱导化疗性静脉炎大鼠模型的构建和评价

      淑敏, 吉海杰

      Abstract:

      【摘要】目的 构建一种贴近临床化疗性静脉炎的大鼠模型。方法 大鼠随机分为空白组和模型组,经后肢足背静脉注射0.1 ml生理盐水设为空白对照组,模型组大鼠则分别注射等体积的2 mg/ml、3 mg/ml、4 mg/ml和5 mg/ml长春瑞滨溶液,每日测量患肢体积并计算肿胀率,连续7天,末次处死动物取病灶足背静脉组织,采用苏木精-伊红染色法(HE)观察组织学改变,同时扫描电镜观察内膜表面微观结构变化。结果 经足背静脉注射2-5 mg/ml长春瑞滨溶液可明显诱发大鼠后肢肿胀,且肿胀率随浓度递增而加剧,同时各浓度组均在第3天达峰值;第7天静脉炎分级显示2 mg/ml组50%大鼠成模,3 mg/ml组为83.3%,而4 mg/ml组和5 mg/ml组大鼠均造模成功,其中前者Ⅲ级为66.7%,后者Ⅳ级占83.3%;HE染色可见静脉周围组织随长春瑞滨溶液浓度增加呈现炎性细胞浸润、管壁增厚、管腔狭窄及血栓,扫描电镜也显示静脉内皮细胞紧密连接破坏,内膜表面粗糙且粘附血细胞。结论 经大鼠足背静脉注射0.1 ml的3-5 mg/ml长春瑞滨溶液可见局部红、肿及条索状静脉,甚至皮肤溃烂,静脉周围组织炎性细胞浸润,静脉壁增厚、管腔狭窄及血栓形成,静脉内膜表面粗糙且粘附血细胞,基本符合临床化疗性静脉炎特征。

      • 1
    • 冠状动脉微血管疾病气虚血瘀证大鼠模型的建立及评价

      康静, 杨丽丽, 王紫艳, 尤越, 史跃, 马彦雷, 孟红旭, 李磊

      Abstract:

      目的 探索建立冠状动脉微血管疾病气虚血瘀证大鼠模型并进行评价。方法 雄性SD大鼠45只,随机分为假手术组、冠脉微血管疾病组和冠脉微血管气虚血瘀证组,每组15只。冠脉微血管疾病气虚血瘀证组动物每天随机14~16 h睡眠剥夺,持续6周,复制气虚证大鼠模型;假手术组及冠脉微血管疾病组动物正常饲养6周。实验6周后,冠脉微血管疾病组和冠脉微血管气虚血瘀证组大鼠麻醉后开胸,向左心室内注射栓塞微球(40~120 μm),假手术组动物行开胸手术但不注射栓塞微球。术后7 d,各组测定相关检测指标。结果 冠脉微血管疾病组可见微球栓塞于冠脉微血管,左室射血分数、左室缩短率明显降低,肌酸激酶MB 同工酶(CK-MB)以及乳酸脱氢酶(LDH)活性明显增加。冠脉微血管气虚血瘀证组心功能、血液流变学、心肌酶指标及心肌细胞损伤程度与假手术比较差异明显。结论 睡眠剥夺复合心室内注射栓塞微球可成功建立冠脉微血管疾病气虚血瘀证大鼠模型,比较符合临床发病特征适合于发病与中药作用机制研究。

      • 1
    • GSH/GPx4介导的铁死亡通路在有氧运动预防自然衰老小鼠模型肝过氧化损伤中的作用

      刘玉倩, 杨雯茜, 王海涛

      Abstract:

      目的 阐明谷胱甘肽(Glutathione, GSH)/谷胱甘肽过氧化物酶 4 (Glutathione peroxidase 4,GPx4)介导的铁死亡(ferroptosis)通路在有氧运动预防小鼠增龄性肝细胞过氧化损伤中的作用机制,为运动改善肝衰老和糖脂代谢紊乱提供新的作用靶点。方法52周龄SPF级C57BL/6雄性小鼠20只,随机分为老年对照组(the elderly control group, EC)和老年运动组(the elderly exercise group, EE),每组10只。16 w递增负荷中等强度运动(1~2w 14 m/min,3~4w 15 m/min,5~10w 16 m/min,11~16w 17 m/min,60 min/d,坡度为0?)。升主动脉灌流后,取肝外侧叶制作HE切片和超薄透射电镜切片。ELISA检测肝线粒体8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2 deoxyguanosine,8-OHdG)、白介素6(interleukin-6,IL-6)、4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)。比色法测定肝糖元、甘油三酯(triglyceride,TG)、丙二醛(malondialdehyde,MDA) 、肝非血红素铁(non-heme iron)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate, NADPH)、GSH。Western blot检测肝GPx4、醌氧化还原酶1(NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1,NQO1)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NAPDH oxidase 2,NOX2)、溶质载体家族 7 成员 11(solute carrier protein 7 family member 11,SLC7A11)表达量。结果 ①有氧运动可有效延缓老年小鼠随年龄增长的肝细胞过氧化损伤,保持肝细胞线粒体正常结构和糖原储备量。②与老年对照组相比,老年运动组小鼠肝GSH和NADPH显著增加(P<0.01)。③与老年对照组相比,老年运动组小鼠肝线粒体8-OHdG和4-HNE、MDA、铁含量和血清炎症因子IL-6含量显著下降(P<0.01)。④运动增加肝GPx4、NQO1、SLC7A11表达量(P<0.01),降低NOX2表达量(P<0.01)。结论 有氧运动通过SLC7A11增加GSH合成,为GPx4提供充足的反应底物,激活GSH/GPx4通路,抑制铁死亡进程,改善增龄引发的肝细胞过氧化损伤,维持肝细胞正常结构与生理功能。

      • 1
    • 单胺氧化酶A(MAOA)在前列腺癌进展中的作用

      陈函沐, 李惠, 赵菊梅, 师长宏

      Abstract:

      单胺氧化酶A(monoamine oxidase A,MAOA)是一种催化单胺类神经递质和膳食胺氧化脱氨反应的线粒体酶,在神经精神疾病的发病、进展和治疗中发挥着重要作用。最近有研究发现前列腺癌(prostate cancer,PCa)中的MAOA表达升高与肿瘤的进展密切相关,是驱动PCa异质性转化的重要因素。本文主要综述了MAOA在前列腺癌不同病程发展中的作用,包括前列腺癌的发生、发展、侵袭、转移以及耐药。讨论了MAOA在肿瘤微环境中的作用及其抑制剂的潜在用途,进一步提出了在临床前模型中开展基于靶向MAOA的治疗研究,推动相关临床试验,以期为PCa的治疗提供新的潜在治疗靶点。

      • 1
    • 模式动物斑马鱼在人乳腺癌疾病研究中的应用进展

      张敏, 张晶晶, 宁国柱

      Abstract:

      斑马鱼异种移植模型在乳腺癌的研究中具有重要的价值,它能够密切观察肿瘤细胞生长、转移以及与免疫系统的相互作用,为乳腺癌治疗提供新的思路和实验依据。此外,斑马鱼模型还可以用于高通量药物的筛选。本篇综述归纳和总结了斑马鱼异种移植模型在乳腺癌发生发展中的机制研究进展,以及抗肿瘤药物在乳腺癌斑马鱼异种移植模型中的相关筛选和治疗研究进展。

      • 1
    • 小尾寒羊颈椎前路椎间盘切除融合优化模型的建立及评估

      窦新雨, 刘宇, 刘啸, 祝斌, 贾斐, 王霖邦, 沈飞, 刘晓光

      Abstract:

      目的 颈椎间盘突出症(cervical disc herniation,CDH)是骨科常见疾病之一,随着对该疾病研究的深入及颈椎内植物的发展,建立颈椎融合动物模型成为不可或缺的部分,目前国内对颈椎融合动物模型建立及评估的研究报道较少,本实验以期为颈椎融合相关研究提供完备的动物模型和内植物性能的评估方案。方法 选择小尾寒羊,改良术式后行颈椎前路椎间盘切除融合术(anterior cervical discectomy fusion,ACDF),将聚醚醚酮(polyetheretherketone,PEEK)椎间融合器(interbody fusion cage, Cage)(对照组)、3D打印钛合金Cage(实验组1)及新方法钛合金Cage(实验组2)分别植入每只羊的不同颈椎节段(C2/3-C4/5),术后行血液学检测、组织病理学分析评估手术恢复情况及材料生物安全性,利用X光、CT、Micro-CT及定量分析、硬组织切片染色、生物力学试验评估内植物的骨长入及骨融合情况。结果 绵羊改良术式ACDF模型建立成功,血液学检测重要指标无显著性差异(P > 0.05),组织病理学分析显示均无炎症细胞浸润等病理改变,内植物生物安全性良好,X光及CT显示内固定位置及椎间融合情况良好,术后3个月及6个月Micro-CT及定量分析表明,与PEEK组相比,新方法钛合金Cage组及3D打印钛合金Cage组内部的骨体积/总体积、骨小梁数目显著性升高(P均< 0.01),骨小梁间距显著性降低(P均< 0.01),且新方法钛合金Cage组骨质长入更多(P < 0.01),硬组织切片染色表明新方法钛合金Cage组及3D打印钛合金Cage组孔隙内有明显骨质长入且较为密实,结合较PEEK Cage组略好,生物力学试验显示,与PEEK Cage组相比,新方法钛合金Cage及3D打印钛合金Cage在一定程度上降低了颈椎屈伸、侧弯、扭转运动范围(P均< 0.05),同时增强了颈椎的稳定性,且新方法钛合金Cage更有优势(P均< 0.05)。结论 建立绵羊改良术式ACDF模型后,利用合理有效的评估方法,证明了该模型的合理性及有效性,同时说明3种材料的Cage均显示出良好的生物安全性,新方法钛合金Cage及3D打印钛合金Cage较PEEK Cage的骨长入及骨融合性能更强,可增强颈椎的稳定性,且新方法钛合金Cage更有优势。

      • 1
    • 肝郁证便秘型肠易激综合征模型的建立与评价

      何佳慧, 何杰滢, 张百荣, 张水娣, 魏苑君, 杨超燕, 陈艳芬

      Abstract:

      目的 采用单因素造模法和多因素联合造模法分别制备肝郁证便秘型肠易激综合征(IBS-C)大鼠模型,通过不同指标比较,提供理想的IBS-C实验动物模型。方法 42只SD大鼠随机分为空白组(Normal组)、冰水灌胃组(Cold组)、束缚组(Restrain组)、夹尾组(Tail组)、冰水灌胃+束缚组(C+R组)和冰水灌胃+夹尾组(C+T组)。造模期间观测各组大鼠的体重、进食量、饮水量和存活情况,进行旷场行为学、粪便Bristol评分、内脏敏感性、小肠推进等指标观测,HE染色观察大鼠结肠病理改变,ELISA法检测血清、结肠中5-HT、VIP含量。结果 造模后,各模型组大鼠体重下降(P < 0.05或P < 0.01),进食量、饮水量减少,各模型组血清中的5-HT含量均有上升。其中Cold组排便粒数及Bristol得分减少,结肠5-HT含量增加(P < 0.05或P < 0.01);Restrain组旷场总路程及平均速度减少(P < 0.01);Tail组糖水偏好降低(P < 0.01);C+T组糖水偏好率、旷场总路程、小肠推进率、排便粒数及Bristol得分减少,结肠中5-HT含量增加,VIP含量减少(P < 0.05或P < 0.01);C+R组旷场总路程、平均速度、结肠中VIP含量减少(P < 0.05);除Tail组,其余模型组在造模7 d、14 d,各压力值下均出现内脏高敏感性(P < 0.05或P < 0.01);病理形态学观察显示,各模型组未见明显的炎性细胞浸润或病理学改变。结论 采用冰水灌胃结合夹尾法可以成功建立肝郁证IBS-C大鼠模型,是5种方法的首选,为系统深入研究治疗中医药防治IBS-C机制奠定了基础。

      • 1
    • 抑郁症相关候选致病基因研究进展

      李梦瑶, 高枫, 郑帆帆, 何盟泽, 何昭, 李优磊

      Abstract:

      抑郁症是一种多基因遗传的复杂性精神疾病,其发病率高,严重者伴有轻生行为。近年来,人们对抑郁症临床表征及发病机制的认识在不断提高。随着基因编辑技术的不断进步,基因敲除动物构建效率大幅提高且成本随之降低,因此越来越多的基因敲除动物被应用于抑郁症基础研究和药物研发领域,为揭示抑郁症发病机制提供了有力工具。本文综述了近年来应用基因敲除鼠模型研究抑郁症候选致病基因作用及机制方面的研究进展。

      • 1
    • PROX-1诱导新生淋巴管参与脊髓针刺损伤后的修复

      陈丹丹, 孟繁伟

      Abstract:

      目的:观察正常及损伤后小鼠脊髓中淋巴管的分布及特点,探讨脊髓损伤修复过程中有无淋巴管的参与。方法:成年雄性昆明小鼠随机分为两组(n=36),正常组不损伤脊髓,损伤组采用针刺法制备脊髓损伤模型。通过免疫组织化学方法检测脊髓中淋巴管内皮细胞的分布,观察正常及针刺损伤后小鼠脊髓中淋巴管内皮细胞标记物同源异型盒基因转录因子1(Prox-1)、淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1(LYVE-1)、平足蛋白(podoplanin)以及血管内皮细胞标记物CD34的表达情况。通过对脊髓样本进行免疫荧光染色,观察LYVE-1/prox-1、LYVE-1/podoplanin及CD34/Prox-1的共表达情况,探讨新生淋巴管内皮细胞的来源。结果:正常成年小鼠脊髓中存在淋巴管样结构,并呈节段性分布,横向走行于白质与灰质之间;针刺损伤处的脊髓出现新生淋巴管样结构,同时表达Prox-1、podoplanin、LYVE-1和CD34,且Prox-1的表达呈现时间有序性;脊髓损伤处瘢痕化后,新生的淋巴管样结构消失。结论:正常成年小鼠脊髓中存在节段性横向分布的淋巴管样结构;脊髓损伤处重建过程中有新生淋巴管样结构的参与,新生淋巴管内皮细胞可能来源于周围既存的淋巴管或血管内皮细胞。

      • 1
    • 新型大鼠慢性骨骼肌复合损伤模型的建立

      中国大陆

      Abstract:

      本研究旨在建立一种新型大鼠慢性骨骼肌复合损伤模型,以深入探究骨骼肌损伤的机制和治疗方法。方法:通过采用垂直打击结合强迫长时坐位成功建立了该模型,并观察到明显的病理改变和生理功能异常。结果:模型组大鼠旷场路程明显低于空白组,HE染色可见肌肉萎缩及断裂、炎症细胞浸润等。测序结果中火山图提示Pf4基因具有显著差异性。模型组大鼠肌肉组织Go分析中氧气结合和氧载体活性通路上调。KEGG提示趋化因子信号通路、AMPK信号通路被激活。结论:本研究成功建立了一种复合型骨骼肌损伤模型该模型可用于研究骨骼肌损伤的病理机制改变和评估治疗方法的疗效,具有实际应用价值。

      • 1
    • 浅谈国外实验大鼠资源的开发与利用

      张乐颖, 徐威, 左琴

      Abstract:

      大鼠是最常用的实验动物之一。因其遗传及环境较易控制并标准化,且体型约为小鼠10倍,容易操作,被广泛应用于生理学、神经行为学、病理学及毒理学等生物医药领域研究。本文回顾了国外百余年来品系培育、保存和数据库建立等大鼠资源开发与利用的发展历程,为我国更好的收集、分享和利用实验大鼠资源提供借鉴。

      • 1
    • NK细胞及其免疫疗法在肿瘤免疫中的应用

      武雪亮

      Abstract:

      摘要 自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)是机体重要的免疫细胞,可以识别并消除病毒感染的细胞和肿瘤细胞。NK细胞可通过多种细胞毒性机制和产生细胞因子对免疫反应进行调节,在抗肿瘤免疫方面扮演着至关重要的角色。本文对NK细胞的发育和分类、作用机制以及基于NK细胞的免疫疗法在肿瘤免疫中的应用进行综述,阐明基于NK细胞的抗肿瘤免疫疗法的原理、现状及发展趋势,以期为今后对NK细胞的研究发展提供思路。

      • 1
    • 基于数据挖掘的青光眼动物模型分析

      袁晞钒, 苗明三

      Abstract:

      目的 研究青光眼动物模型应用情况,为其动物实验方法和模型完善提供参考。方法 以“青光眼”和“动物模型”为主题词,在中国知网、PubMed中收集2012年至2022年青光眼动物模型的相关文献,总结实验动物种类、性别、造模方法、检测指标等,建立数据库进行统计分析。结果 共筛选得到符合标准的400篇文献,其中实验动物多为C57BL / 6J小鼠,动物性别以雄性居多;造模方法多采用前房注射物质诱导型、转基因型和激光光凝诱导型;高频检测指标主要包括眼压测量、组织病理、蛋白质印迹分析和免疫组化。结论 目前青光眼动物模型造模方法种类较多,但是相关中医因素干预较少,建议增加病证结合的青光眼动物模型。本研究通过对青光眼动物模型实验进行挖掘分析,对不同动物模型进行评估,通过挖掘内容为构建造模成功率高、重现性好、与临床吻合度高的动物模型提供参考,为模型完善提供思路。

      • 1
    • 基于OPG/RANK/RANKL信号通路探讨铁筷子对CIA大鼠骨破坏的防护作用

      单文婷, 刘霞

      Abstract:

      【摘要】 目的 探讨铁筷子对胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)模型大鼠的抗炎作用及对OPG/RANK/RANKL信号通路的影响。方法 雌性wistar大鼠60只分为:(1)正常组(Control),(2)模型组(Model),(3)阳性药物组(甲氨蝶呤,MTX),(4)低剂量组,(5)中剂量组,(6)高剂量组。采用胶原抗体诱导法于大鼠尾根部注射牛Ⅱ型胶原蛋白建立CIA大鼠模型,模型建立成功后进行灌胃给药,正常组:给予10mL/(kg·d)生理盐水;模型组:给予10mL/(kg·d)生理盐水;阳性药物组每次给予2.0mg/(kg·d)MTX,每周3次;铁筷子低、中、高剂量组每次给予0.25g、0.5g、1.0g/(kg·d);连续灌胃治疗25d。通过记录大鼠体质量;观察大鼠足肿胀程度;大鼠踝关节炎指数评分;micro-CT观察踝关节骨组织病理改变;苏木素-伊红(HE)染色对大鼠踝关节骨组织和滑膜病理变化;抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法检测观察破骨细胞数量的改变;PCR检测骨保护素(OPG)、核因子-κB受体激活剂(RANK)、RANK配体(RANKL)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和骨形成蛋白2(BMP-2)的mRNA水平,OPG、RANK、RANKL、TNF-α和BMP-2蛋白相对表达量检测用蛋白免疫印迹法(Western blot),以确定铁筷子对类风湿性关节炎大鼠的治疗作用及其对骨关节保护的潜在药理机制。结果 实验结果显示:数据统计结果表明,与正常组比较,CIA大鼠体质量增长减慢(P<0.05),足底厚度增加(P<0.05),踝关节出现关节腔变窄,骨组织啃噬样骨质破坏、滑膜的病理性变化,如炎性细胞增生和滑膜异常增生浸润;Micro-CT结果显示:与正常组比较,模型组、低、中剂量组,踝关节表面凹凸不平、外形不完整,踝关节表面出现啃噬样骨质破坏,高剂量组与正常组比较各项指标变化都不明显;HE染色发现模型组大鼠踝关节出现关节腔变窄,骨组织啃噬样骨质破坏、滑膜组织增生和炎性细胞浸润等病理改变;与模型组相比,低、中、高剂量组大鼠踝关节骨组织增生和炎性浸润显著改善;TRAP染色观察与正常组比,模型组破骨细胞数量最多,低、中、高剂量组干预下 TRAP染色阳性破骨细胞数量逐渐减少;qRT-PCR的结果,与模型组比,低、中、高剂量组OPG、BMP-2 mRNA相对表达量升高(P<0.05),RANK、RANKL、TNF-α mRNA相对表达量降低(P<0.05);WB的结果,与模型组比,低、中、高剂量组OPG、BMP-2蛋白相对表达量升高(P<0.05),RANK、RANKL、TNF-α蛋白相对表达量降低(P<0.05)。结论 铁筷子可能通过调节OPG/RANK/RANKL信号通路缓解RA大鼠体内炎症反应,发挥其抗类风湿性关节炎机制的作用。

      • 1
    • 2型糖尿病及其微血管并发症动物模型生化指标特征分析

      代浩然, 王跃, 王旭, 刘静, 吴修红

      Abstract:

      2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)是一种严重危害人类健康并以高血糖为特征的代谢性疾病,其患病率在全国范围内不断上升。患者在长期的高血糖水平状态下,产生严重的微血管并发症如糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)、糖尿病足(diabetic foot, DF)、糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)。如今T2DM已经成为世界公共卫生健康问题,如何进行有效治疗T2DM,预防微血管并发症的产生,已经成为医学亟待解决的重要课题。迄今为止,动物模型仍然是研究T2DM及其微血管并发症病理生理学和治疗的主要工具,亟需建立高度吻合的动物模型,而生化指标是动物生理状态和机体健康状况最直观的反映,在评价模型是否成功中至关重要,往往影响着实验结果。同时生化指标也是进行疾病诊断及药物干预的重要参考依据。本研究通过总结T2DM及其微血管并发症动物模型的实验数据,对其生化指标进行分析,以期为今后进行相关试验提供理论参考。

      • 1
    • 轻中度闭合型创伤性脑损伤小鼠模型建立及评价

      卜苑静, 徐东刚

      Abstract:

      【摘要】 目的 建立稳定的轻中度闭合型创伤性脑损伤小鼠模型并对其进行评价。 方法 将170只SPF级ICR小鼠分为假手术组(Sham组,n=34)和模型组(TBI组,n=136)。将TBI组按照A-D的条件进行脑损伤敲击,每组34只。造模后通过mNss评分、疲劳转棒实验、Morris水迷宫实验评估小鼠平衡运动能力和学习记忆能力;脑含水量实验、伊文思蓝实验、HE染色、GFAP免疫组化以及TUNEL免疫荧光分析脑组织病理改变。 结果 与Sham组比较,TBI组的mNss评分值和水迷宫逃避潜伏期出现不同程度的升高,停留转棒时间明显下降,表明TBI组小鼠出现严重的神经功能障碍。TBI组小鼠脑组织内的含水量和伊文思蓝含量明显高于Sham组,提示该组小鼠血脑屏障受损并出现脑水肿。组织病理学检测显示,TBI组小鼠脑组织神经元出现明显变性皱缩,星形胶质细胞显著增生且凋亡细胞比例显著增加,损伤程度随打击物重量的增加而加重。综合分析表明,在下落高度为20 cm,打击重量为60 g和80 g时表现轻度颅脑损伤,打击重量为100 g和120 g时可模拟出为中度颅脑损伤。 结论 基于自由落体原理建立了稳定的轻中度闭合性小鼠脑损伤模型,为mmTBI的机制和治疗研究奠定了基础。

      • 1
    • 基于改良大鼠双侧颈总动脉结扎法建立血管性痴呆模型探讨脑血流量变化规律及对血管新生相关蛋白的影响

      陈婕, 唐鑫, 陈盼, 谢紫薇, 谢海花, 张泓, 邹莹洁, 谭洁

      Abstract:

      【摘要】 目的 通过改良大鼠双侧颈总动脉结扎法建立VD大鼠模型观察其脑血流量变化规律及血管新生蛋白表达等变化。 方法 将36只Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为假手术组(n=18)和模型组(n=18),假手术组只分离双侧颈总动脉不作结扎,模型组行双侧颈总动脉结扎法制备VD模型,于造模前、造模后14 d采用Morris水迷宫进行行为学测试,激光散斑衬比成像检测脑血流量变化,Western Blotting法检测HIF-1α、VEGF及HO-1蛋白表达,ELISA法检测IL-4、IL-10含量。 结果 造模后14 d,与假手术组比较,模型组逃避潜伏期延长、穿越平台次数减少(P<0.05);造模后2 h、3 d、7 d,模型组较假手术组脑血流量显著降低(P<0.05),造模后第14 d、21 d,假手术组和模型组的脑血流量变化无显著差异(P>0.05);模型组在造模后2 h脑血流量降至最低(P<0.05),此后脑血流量开始恢复,恢复高峰期发生在造模后3-7 d,并于造模后14 d恢复至造模前水平;造模后21 d,模型组海马区HIF-1α、VEGF及HO-1蛋白表达含量较假手术组明显升高(P<0.05),模型组血清中IL-4、IL-10的含量较假手术组明显升高(P<0.05)。 结论 改良大鼠双侧颈总动脉结扎法建立VD模型的脑血流量变化呈现一定时间规律,造模后21 d该模型海马区HIF-1α、VEGF及HO-1的表达显著增加,并伴随IL-4和IL-10含量的升高。

      • 1
    • 自发矮小症雌性SD大鼠不孕的机制初探

      龙红, 霍春茂, 李康, 包风云, 秦廷洋, 赵玉佳, 张仕斌

      Abstract:

      目的 探讨自发矮小症雌性SD大鼠(short stature rat, SSR)不孕的原因及其致病机理研究。方法 以成年野生型和SSR雌性SD大鼠为研究对象,采用阴道涂片法观察动情周期变化;采用同期发情超数排卵方法比较促排卵效果;测定卵巢、子宫重量及体重、卵巢、子宫指数;测定血清中AMH、E2、FSH、LH、FSH/LH含量;将对卵巢组织进行转录组学测序以分析基因表达差异。结果 SSR雌性大鼠动情周期无异常,SSR雌性大鼠体重显著低于野生型,其卵巢指数和子宫指数显著高于野生型。排卵结果显示,野生型SD大鼠平均排卵数量显著高于SSR雌性不孕大鼠(p<0.001); 野生型SD大鼠血清AMH(p<0.01)、E2(p<0.05)水平显著高于SSR雌性不孕大鼠,血清FSH(p<0.01)、LH(p<0.01)及FSH/LH(p<0.05)水平显著低于SSR雌性不孕大鼠,PROG则不显著; 转录组测序获得250个差异表达基因,其中有190个上调基因,60个下调基因。GO和KEGG分析结果显示,差异表达基因主要富集在IL-17信号通路(IL-17 signaling pathway)、p53信号通路(p53 signaling pathway)和细胞因子-细胞因子受体相互作用(cytokine-cytokine receptor interaction)等。利用CytoHubba插件的MCC、MNC、EPC和Degree计算法分别筛选前10的重要节点,取交集最后得到9个Hub基因,分别为Cxcl1、Cxcl2、Il1a、Il1b、Cd80、Mmp13、Mmp8、Fgf3、Ptgs2。结论 SSR雌性大鼠不孕可能与卵巢储备功能下降和卵巢低反应有关,同时筛选出Cxcl1、Cxcl2、Il1a、Il1b、Cd80、Mmp13、Mmp8、Fgf3和Ptgs2与不孕相关,为进一步探究不孕机制奠定理论基础。

      • 1
    • 不同的生酮饮食影响骨骼肌表现与疲劳恢复的研究进展

      李婷婷, 张慧, 张铭宸, 王宏英, 张萍萍, 王孝文, 孙忠广

      Abstract:

      目的:就生酮饮食对动物与人类的运动表现与疲劳恢复情况做一综述,旨在为竞技运动与康复训练提供饮食方案。方法:遴选“PubMed,Web of Science,Embase”英文数据库和“知网,维普,万方,中国生物医学文献服务系统”中文数据库,以“(ketogenic diet) and (athletic performance) or (exercise fatigue recovery)”、“(生酮饮食)和(运动表现)或(运动疲劳恢复)”为检索式分别检索,不限检索年限,根据入选标准及排除标准,最终纳入相关文献42篇。结果:生酮饮食可升高血酮,为骨骼肌供能,在骨骼肌表现与疲劳恢复中发挥一定的调节作用。①生酮饮食通过轴突发芽和神经再支配使肌纤维Ⅱb向Ⅱa转变,改善快肌的线粒体的质量与功能,增加组蛋白乙酰转移酶以增强骨骼肌力量;②生酮饮食利用酮体供能,在慢肌中降低糖酵解、提升脂肪酸氧化的能力以提高运动耐力;③生酮饮食减轻了骨骼肌的内质网应激、氧化应激与炎症反应,保护机体免受损伤,可减少肌糖原的消耗与乳酸的积累,减轻运动后疲劳促进疲劳恢复。结论:生酮饮食对机体产生的负面影响较低,能提升动物的运动表现与疲劳恢复,在人类中起维持作用,可作为竞技运动与康复训练中的饮食方案。

      • 1
    • 皮质醇用于评估犬应激压力的研究进展

      孙宁, 付家琳, 徐澍, 俞熙, 水映懿, 朱启文

      Abstract:

      近年来,人们将皮质醇(Cortisol)作为评估犬 (Canis familiaris) 压力的生物标志物。为了评估犬的福利状况,本文综述了犬在各种应激压力下皮质醇水平及其变化情况,并根据犬皮质醇的变化规律,探究缓解犬压力源的影响因素,进一步完善缓解犬压力的措施。建议使用皮质醇测定结合行为观察等多个生理指标,以更准确地评估犬的抗应激压力水平。

      • 1
    • 用于新型冠状病毒研究的小鼠和猴子动物模型

      董娥, 张博, 陈庭伟, 李孝琢, 李天晴

      Abstract:

      随着严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2 (SARS-CoV-2)在世界范围内持续传播,其基因组在不断突变进化,出现了α、β、γ、δ等不同的毒株,因而持续研发针对不同毒株的药物和疫苗是应对新冠疫情的核心。而构建SARS-CoV-2的动物模型不仅可以研究新冠病毒的致病机制,也是评价SARS-CoV-2相关药物与疫苗治疗效果的关键。然而,常用的模式动物小鼠对野生型的SARS-CoV-2不易感,因此迫切需要能够感染新冠且更好地模拟人体病理生理状态的动物模型。本综述回顾了用于新冠病毒感染和传播的动物模型,以及这些模型在表征病毒免疫病理学方面的进展。

      • 1
    • II型心肾综合征大鼠模型制备方法的改良

      刘茜, 王新婷, 程培培, 戎靖枫, 杨天舒, 周华

      Abstract:

      目的 建立一种改良的II型心肾综合征大鼠模型并进行评估。方法 将20只雄性SD大鼠随机分为假手术组(7只)与模型组(13只)。采用在小动物麻醉机下挤心脏法进行永久性结扎冠状动脉左前降支造成心肌梗死,1周后行单侧肾脏(右肾)切除术,第6周行心脏超声、病理学染色及血液、尿液等检测来验证模型的建立。 结果 与假手术组相比,模型组大鼠心超检测的心功能、内生肌酐清除率明显下降(P<0.01),脑钠肽、血肌酐、尿素氮、24h尿蛋白明显升高(P<0.01);HE染色发现模型组大鼠心肌排列紊乱,肾小球萎缩伴炎症细胞浸润。苦味酸-天狼猩红染色发现模型组大鼠心肌胶原纤维明显增多,肾小管排列不规则,大量胶原沉积,阳性染色面积比明显升高(P<0.01)。 结论 本改良造模方法能够提供一种操作简便、手术创伤小、死亡率低的II型心肾综合征大鼠模型,模拟了早期心、肾功能损伤和病理改变,为系统深入研究II型心肾综合征的发病机制及药效作用机理奠定了基础。

      • 1
    • 聚焦基因治疗的扩张型心肌病模型构建及进展

      陈玉林, 信科

      Abstract:

      扩张型心肌病是引起心力衰竭的主要疾病之一,存在病因学异质性,近1/4扩张型心肌病患者与遗传相关,心室扩大和心肌收缩功能障碍是该病的主要特征。LMNA突变是遗传性扩张型心肌病的重要病因,心律失常是LMNA突变遗传性扩张型心肌病的重要临床表征。近年来基于C57/B6遗传背景小鼠聚焦基因治疗的啮齿类动物扩张型心肌病模型构建及其干预是研究的热点,以及犬和猪的大动物模型构建也得出了一些重要结论,但关于大动物尤其是非人灵长类依然是更贴近人类的模型,目前对于非人类灵长类动物的心脏疾病模型并未涉及扩张型心肌病,故本文综述了基因层面的扩张型心肌病啮齿类动物及大动物模型的研究,也提出可进行基于当前研究基础上的非人灵长类扩张型心肌病模型的理念,为今后有针对性地研究致病机制以及临床治疗提供新思路。

      • 1
    • 基于肠道菌群和短链脂肪酸代谢探讨不同饮食条件下高脂血症大鼠发病机制

      杨宗统, 孙铁锋, 李晓晶, 徐东川, 袁敏, 靳光乾, 王雯慧

      Abstract:

      目的 本研究拟对比两种不同高脂饮食方式诱导的高脂血症大鼠肠道菌群变化与短链脂肪酸代谢特征,以宿主-肠道菌群-代谢角度探讨高脂血症可能的微观机制。 方法 SPF级SD大鼠分为:(1)正常饮食组(CG组),饲喂大鼠维持饲料(2)高脂饮食组(HFD1组),每天足量饲喂高脂饲料,(3)限饲高脂饮食组(HFD2组),每天限量饲喂高脂饲料80g,不限量饲喂维持饲料。8周后检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠肝脏组织和肾周脂肪病理学变化;取结肠内容物进行16S rRNA高通量测序,观察肠道菌群结构与功能的变化,并检测结肠内容物中短链脂肪酸的含量。结果 与CG组相比较,HFD1组和HFD2组大鼠摄食量下降,体重升高;血清中TC 、TG、LDL-C均显著升高;肝脏组织发生明显脂肪变性,肾周脂肪出现炎性病变;高脂干预后大鼠肠道菌群相对丰度显著变化,其中乳杆菌属相对丰度明显降低,菌群结构和功能变化明显,总短链脂肪酸、乙酸、丁酸、异丁酸下降显著。结论 两种高脂饮食方式均能引起大鼠高脂血症,且发病机制基本一致,均与脂质代谢以及肠道菌群紊乱有关。每日限制一定的高脂饲料饲喂量不仅能够降低高脂饲料对大鼠食欲的影响,还能提高大鼠高脂血症模型制备的稳定性,是一种值得推广应用的大鼠高脂模型制备方法。

      • 1
    • 熊胆粉对大鼠早期肝癌促进阶段影响的研究

      董锐, 张梅, 洪泽宣, 唐倩, 邹昕羽, 贾贵阳, 倪元萍, 涉谷淳, 金美兰

      Abstract:

      目的 天然传统中药熊胆粉(BBP)有抗氧化、抗肿瘤作用。为了解明熊胆粉在肝癌早期阶段的修饰作用,利用大鼠短期致癌模型进行了BBP的抗癌药效实验。方法 40只5周龄雄性SD大鼠分成以下4组:DEN单独组,DEN+PBO组,DEN+PBO+BBP-L(200mg/kg)组,DEN+PBO+BBP-H(400mg/kg)组。实验开始时,所有的大鼠腹腔注射200 mg/kg DEN,并三组动物饲喂了0.5% PBO粉末饲料。 后两组动物同时灌胃200或400mg/kg BBP8周。结果 PBO处理组的绝对及相对肝重量显著大于DEN单独组。但是,DEN+PBO+BBP-L组的GST-P阳性病灶的数量和面积与DEN+PBO组相比显著减少。同时,因DEN和PBO处理显著增加的Ki-67阳性细胞率也在BBP处理组显著减少。有趣的是,细胞周期相关的Ccne1, Cdkn1b和细胞凋亡相关的Caspase 8, Caspase 9仅在DEN+PBO+BBP-H组中显著增加, 在BBP-L组中没有变化。结论 这些结果提示,BBP在肝癌形成早期阶段通过抑制癌前病灶发挥抑制作用,且抑制细胞增殖活性和诱导细胞凋亡参与它的抗癌机制。此外,这些结果表示高剂量的BBP可能影响它的抑制癌前病灶作用。

      • 1
    • 足底注射完全弗氏佐剂致疼痛抑郁共病模型大鼠行为学及单胺类神经递质改变

      羊璞

      Abstract:

      目的 观察足底注射完全弗氏佐剂对大鼠疼痛抑郁行为的影响及海马单胺类神经递质的变化,旨在建立相关共病动物模型。方法 将16只8周龄SPF级健康雄性SD大鼠随机分为模型组与对照组,每组8只。模型组大鼠麻醉后通过于左后足底注射完全弗氏佐剂 100 μL,建立疼痛抑郁共病模型大鼠,对照组注射同体积生理盐水。采用von Fery纤维丝和热辐射刺激仪测量大鼠的疼痛阈值,采用旷场实验、悬尾实验、强迫游泳实验评价大鼠的抑郁行为,采用酶联免疫吸附实验检测大鼠海马组织的5-羟色胺、多巴胺、去甲肾上腺素的含量,采用苏木素-伊红染色观察大鼠海马区病理改变。结果 与对照组比较,模型组大鼠机械缩足阈值及热缩足反射潜伏期在3、7、14d明显降低(P < 0.01);与对照组比较,模型组大鼠旷场实验运动总距离在7、14d明显减少(P < 0.01),中央区停留时长在14d明显降低(P < 0.01);与对照组比较,模型组大鼠悬尾实验不动时间在14d明显增加(P < 0.01);与对照组比较,模型组大鼠强迫游泳实验不动时间在7d、14d明显增加(P < 0.05, P < 0.01);与对照组比较,模型组大鼠海马中5-羟色胺、多巴胺、去甲肾上腺素含量明显减少 (P < 0.01)。与对照组比较,模型组大鼠海马组织病理发生改变,神经元形态不规则,排列松散、紊乱,细胞间隙增大,部分细胞核模糊,出现部分神经元固缩、凋亡。结论 100 μL 完全弗氏佐剂足底注射可引起大鼠痛觉过敏、抑郁行为学改变及海马单胺类神经递质明显降低,造成海马病理形态变化,可有效模拟疼痛抑郁共病的表现,是一种可用于疼痛抑郁共病病理机制研究的实验模型。

      • 1
    • 肿瘤研究中的实验动物福利与使用

      张伶俐

      Abstract:

      在肿瘤发生机制及预防诊断和治疗的研究中,动物实验作为介于体外细胞实验和临床实验之间的中间环节,是至关重要的。动物福利与动物实验的结果直接相关,是影响研究结果科学性和准确性的重要因素。本文整理了肿瘤研究中涉及到实验动物的相关方面,主要包括:肿瘤动物模型、肿瘤模型相关动物福利及人道终点等。

      • 1
    • 全身型幼年特发性关节炎与巨噬细胞活化综合征的动物模型研究进展

      黎峰铭, 唐雪梅

      Abstract:

      全身型幼年特发性关节炎(systemic juvenile idiopathic arthritis,sJIA)是最常并发巨噬细胞活化综合征(macrophage activation syndrome,MAS)的风湿性疾病,可威胁患儿生命。目前的实验动物模型仅显示出了部分sJIA及MAS的特性,尚没有一个完美的动物模型能够复制sJIA及MAS整个过程。本文对这些模型模拟的临床特征、优点及存在的不足进行综述,旨在为探索代表性更佳的sJIA及MAS的动物模型提供思路。

      • 1
    • 活体脑部神经递质检测技术的研究进展

      朱铭钰, 崔利利, 陈欢, 侯宏卫, 胡清源

      Abstract:

      神经递质作为一种内源性化学物质,在维持人正常生命活动等方面发挥着至关重要的作用。神经递质水平异常会导致人身体、精神以及一些神经退行性疾病的发生。然而,神经递质超低的浓度、复杂的化学性质以及释放模式,使体内其准确检测面临巨大挑战。为了精确监测大脑神经递质,准确了解神经递质释放动力学,对近五年来常用的几种活体检测神经递质的方法及其研究进展进行了综述。详细介绍了微透析法、电化学传感器以及荧光传感器的基本原理及其适用性。

      • 1
    • 复合刺激诱导多种呼吸系统疾病急性加重期动物模型的研究进展

      邱志广, 邵雪洁, 卢瑞龙, 田燕歌, 任周新

      Abstract:

      基于临床实践的复合因素,如二次打击模式,在呼吸系统疾病急性加重模型的制作中取得了一定进展。本文汇总了复合因素构建的大鼠和小鼠肺纤维化、慢性阻塞性肺疾病和支气管哮喘急性加重模型,从动物品系选择、模型制备方法和主要的组织病理学变化等方面进行比较和分析,阐释每种模型的特征和适用范围,以期为研究者进一步改良和完善模型或合理选择模型提供参考。

      • 1
    • miR-185-5p影响小鼠乳腺癌PY8119细胞增殖、侵袭迁移的研究

      刘璐, 赵燕乔, 王晓娜, 王坤, 尹崇高, 刘清华, 李洪利

      Abstract:

      目的 探讨miR-185-5p对小鼠乳腺癌PY8119细胞增殖、侵袭迁移能力的影响。方法 本研究通过前期课题组研究获得乳腺癌中表达显著下调的miRNA即miR-185-5p;通过NCBI查询人源与鼠源miR-185-5p基因序列一致;通过EdU增殖实验检测过表达和敲低miR-185-5p对PY8119细胞增殖能力的影响;通过Transwell侵袭实验检测过表达和敲低miR-185-5p对PY8119细胞侵袭能力的影响;通过划痕愈合实验检测过表达和敲低miR-185-5p对PY8119细胞迁移能力的影响;通过流式细胞术检测过表达和敲低miR-185-5p对PY8119细胞凋亡能力的影响;通过C57BL/6小鼠皮下肿瘤模型检测过表达miR-185-5p对体内肿瘤增殖能力的影响;通过尾静脉注射观察过表达miR-185-5p小鼠肺部转移情况。结果 通过EdU增殖实验、Transwell侵袭实验、划痕愈合实验、流式细胞术结果分别显示,敲低miR-185-5p使PY8119细胞的增殖、侵袭、迁移能力显著增强,抑制细胞凋亡;而过表达miR-185-5p抑制PY8119细胞的增殖、侵袭、迁移能力,促进细胞凋亡;C57BL/6小鼠体内成瘤实验显示,过表达miR-185-5p减缓C57BL/6小鼠体内肿瘤生长速度;肺转移实验显示,过表达miR-185-5p抑制C57BL/6小鼠肺转移能力。结论 miR-185-5p作为抑癌基因抑制小鼠乳腺癌PY8119细胞体内外增殖、侵袭迁移的能力。

      • 1
    • 阿尔兹海默病动物实验的研究热点与趋势:基于WOS数据库的CiteSpace文献计量分析

      杨加辉, 林荫, 陈来, 罗小泉

      Abstract:

      目的 阿尔茨海默病(AD)给患者、社会带来巨大的负担,动物实验作为研究AD的重要手段,为临床和科研人员提供了大量的科学依据。本文采用文献计量分析的方法,揭示AD动物实验领域的研究现状、热点和趋势。方法 我们从 Web of Science 核心合集(WoSCC)数据库中获取了 2018年至2022年关于AD动物实验领域的出版物。我们使用分析软件CiteSpace 6.2.R2(Advanced)对该领域相关出版物的一般信息及关键词进行分析。结果 分析本研究纳入的2018年至2022年4015篇文章,发现论文年度发表量逐步增加。从文章数量来看,美国、加州大学系统、Saito T和《国际分子科学杂志》分别是发文量最多的国家、机构、作者、期刊。“阿尔兹海默病”出现频率最高,“焦虑”中心度数最高。结论 该领域侧重于发病机制和治疗方法方面的研究,内嗅皮层、神经元和突触的可塑性是目前研究的热点。未来的研究趋势可能主要集中于Aβ斑块形成??、tau蛋白过度磷酸化、神经原纤维缠结积累、神经胶质炎症,以及最终丧失适当的神经可塑性。本文直观地分析了AD动物实验的热点与趋势,以帮助研究人员了解最新情况。

      • 1
    • 围绝经期抑郁症大鼠海马Notch信号通路基因的表达与甲基化水平研究

      沈建英, 梁文娜, 陈惠芳, 张凌媛, 庄垸荧, 陈晓阳, 陈雅茹, 肖琼琼, 杨敏, 龚琳, 闵莉

      Abstract:

      【摘要】 目的 从表观遗传学之基因启动子DNA甲基化角度探讨围绝经期抑郁症对大鼠海马齿状回Notch信号通路关键基因表达及其启动子DNA甲基化的影响。方法 将12月龄雌性围绝经期SD大鼠随机分为对照组和模型组。采用旷场实验和糖水消耗验进行行为学评价。采用实时荧光定量PCR法检测大鼠海马齿状回Notch信号通路关键基因的表达。运用重亚硫酸氢盐测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法分析Notch信号通路关键基因启动子区的甲基化位点及其甲基化水平。结果 围绝经期抑郁症大鼠旷场实验水平得分和垂直得分及糖水消耗率均显著下降;围绝经期抑郁症大鼠海马组织中Notch信号通路关键基因Jagged1、Notch1和Hes5的表达均发生显著下调(P<0.01或P<0.05);其中Hes5基因的部分甲基化位点及其甲基化率均显著增加,而Jagged1和Notch1基因的甲基化位点及其甲基化率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 围绝经期抑郁症大鼠海马齿状回Notch信号通路关键基因表达显著下调,其中Hes5基因表达下调可能与其启动子DNA甲基化水平上升有关。

      • 1
    • 类风湿关节炎伴发抑郁症模型大鼠制备与评价探讨

      李媛媛, 张碧涛, 范培健, 崔子龙, 王少贤

      Abstract:

      目的 制备并评价类风湿关节炎伴发抑郁症(RAD)动物模型。 方法 32只大鼠随机分为正常组(N组)、抑郁组(D组)、关节炎组(RA组)、模型组(RAD组),每组8只。N组正常饲养,D组施加1周孤养与3周慢性不可预知温和刺激(CUMS),RA组予胶原诱导性关节炎(CIA)方法建立关节炎模型,RAD组在建立CIA动物模型基础上施加1周孤养与3周CUMS建立RAD动物模型。通过观测大鼠足趾容积、关节炎指数(AI),滑膜、踝关节病理和血清白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平评价大鼠类风湿关节炎模型是否制备成功;通过测定体重、摄食量、糖水偏好率、旷场行为学(运动总格数、直立次数),血清促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)水平及海马病理变化评价大鼠抑郁状态。模型大鼠同时符合上述抑郁状态与类风湿关节炎相关指标检测,则表明RAD动物模型制备成功。 结果 与N组比较,RA组与RAD组大鼠足趾容积、AI评分及血清IL-1β、IL-6水平显著增加(P<0.05或P<0.01),关节间隙增宽,滑膜增生明显并延伸至关节腔,可见大量炎细胞浸润,D组与RAD组大鼠体重、摄食量、运动总格数、直立次数、糖水偏好率有不同程度降低,血清CRH、ACTH、CORT水平有不同程度升高(P<0.05或P<0.01),神经元细胞排列疏松,间隙增大,数量减少,伴有部分细胞核固缩、溶解、破裂,模型组尤为明显。 结论 胶原诱导性关节炎联合孤养与CUMS可较好的模拟RAD模型动物外在表现与内在指标变化,可为RAD疾病的研究提供动物模型参考。

      • 1
    • 定量口鼻吸入法建立大鼠慢性阻塞性肺病模型

      刘学武

      Abstract:

      目的 比较烟雾经口鼻吸入 脂多糖(LPS)气管滴注和烟雾全身暴露 脂多糖气管滴注诱导的大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型的差异,为COPD模型的构建提供新的造模方法。方法 将90只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、烟雾全身暴露组、烟雾口鼻吸入组,30只/组。烟雾全身暴露组采用自制熏烟箱进行烟雾的全身暴露,烟雾口鼻吸入组采用“定量吸烟装置”进行口鼻吸入烟雾,两组动物均每天进行烟雾暴露1次,60min/次,连续8周,同时分别于造模第1、7、15、21d经气管注入LPS(1mg/kg),以诱导建立COPD模型。对定量吸烟装置生成的烟雾进行质量控制,分别包括烟雾颗粒的浓度稳定性和均一性验证,烟雾颗粒的粒径分布,并分别于造模4、6、8周通过肺功能检查、肺泡灌洗液炎症因子白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量检测、组织病理学检查来比较两种造模方式的差异。结果 定量吸烟装置能生成浓度稳定的烟雾[浓度分别为1.1mg/L(以颗粒计)和0.1mg/L(以尼古丁计)],且其质量中值粒径MMAD(以尼古丁计)为0.693μm,GSD:1.463;烟雾口鼻吸入组大鼠肺功能FEV0.2/FVC、肺顺应性(Cdyn)指标均较烟雾全身暴露组下降更为明显,气道阻力(Penh)增加更明显;烟雾口鼻吸入组大鼠肺泡灌洗液IL-6、TNF-α水平在造模后6周即可见显著增加,烟雾全身暴露组大鼠需至造模8周。烟雾口鼻吸入组和全身暴露组大鼠造模后支气管炎症病变程度基本相当,但肺气肿病变程度以口鼻吸入组更严重(统计学差异出现时间:口鼻吸入 vs 全身暴露=造模6周 vs 造模8周);烟雾口鼻吸入组平均内衬间隔(MLI)在造模4~8周均显著增大,平均肺泡数(MAN)在造模6~8周均显著减少;烟雾全身暴露组仅造模8周可见MLI显著增大和MAN显著减少。烟雾口鼻吸入组肺功能指标(FEV0.2/FVC、Cdyn、Penh)、肺泡灌洗液细胞因子水平(IL-6、TNF-α)、肺泡组织病理学变化(支气管严重和肺气肿病理评分、MLI、MAN)在造模后的均可见显著的异常改变,但各指标变化的变异系数(CV%)明显小于烟雾全身暴露组的相应指标。结论 LPS(1mg/kg)气管滴注联合烟雾全身暴露或烟雾口鼻吸入均能构建典型的大鼠慢性阻塞性肺病模型,其中烟雾口鼻吸入能缩短模型构建的造模周期,连续造模6周即可成模,表现为典型的慢性阻塞性肺病症状(肺通气功能障碍,支气管-肺脏慢性炎症浸润,并同时伴有肺气肿),且模型动物个体间的差异更小(vs 烟雾全身暴露,CV%值更小)。

      • 1
    • 动物元认知的研究进展

      王婉宁, 贾宁

      Abstract:

      元认知曾被认为是人类独有的高级认知能力,动物是否具有元认知是比较心理学领域争论的热点问题之一。该问题的探讨已成为挖掘元认知的系统发育根源,绘制人类高级认知功能进化历程的重要途径。本文对过去二十五年间主要的动物元认知研究进行了梳理,总结了不确定性监控范式、信息搜寻范式与信心判断范式三种常用的研究范式与对应的测量指标,概述了动物元认知研究领域中联想模型和元认知模型两种对立的解释倾向及其依据。针对联想模型与元认知模型的争论,提出改进研究范式来检验元认知模型与创新理论以整合模型两种未来的研究取向。

      • 1
    • 基于数据挖掘的扩张型心肌病动物模型研究

      葛君玺

      Abstract:

      目的 梳理国内外扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy, DCM)动物模型的动物种类、造模方法、评价指标,为提高造模成功率和未来建立中医药特色的DCM动物模型提供建议,为未来DCM动物模型建立标准提供参考。方法 检索近10年扩张型心肌病动物模型的文献,收集整理相关报道,归纳总结实验动物相关参数(种类、性别、体重等)、造模方式、造模周期、阳性对照药种类及周期、模型评价指标等,并进行分析。结果 共纳入128篇文献。多采用蒽环类药物阿霉素诱导SD大鼠和Wistar大鼠制备扩张型心肌病动物模型,周期在30 d

      • 1
    • TMAO对脾虚高脂血症大鼠脂代谢的影响及香砂六君子汤的干预作用

      冷雪, 李阳

      Abstract:

      目的 本研究拟探讨肠道菌群代谢物TMAO对脾虚高脂血症大鼠肝脏脂质代谢的影响,并进一步探讨香砂六君子汤干预肝脏脂质代谢紊乱的可能机制。方法 SD大鼠分为:(1)空白对照组(C组),(2)空白对照组 DMB(C D组),DMB为TMAO抑制剂,(3)脾虚高脂血症组(PG组),(4)脾虚高脂血症 DMB组(PG D)(5)脾虚高脂血症 香砂六君子汤组(PG XS组),除C组、C D组外其它各组构建以以劳倦过度和高脂饲料相结合建立脾虚高脂血症模型(造模12周),模型建立后C D组、PG D组每天饮用水中给予1%DMB,PG XS组每天灌胃香砂六君子汤(11.34 g生药/kg/天),其余给予等量生理盐水,4周后进行取材检测。全自动生化仪检测大鼠血脂含量;HE、油红O观察大鼠肝脏变化及脂质沉积情况;ELISA法检测大鼠肝脏FFA变化;试剂盒法检测各组大鼠TG、TC含量;LC-MS法检测大鼠血浆TMAO含量;qRT-PCR法检测大鼠肝脏PERK、FOXO1、SREBP-2、 ABCA1、miR-33 mRNA相对表达水平;WB检测大鼠肝脏SREBP-2、 ABCA1蛋白表达。 结果 (1)PG组大鼠血清中TC、TG和LDL-C含量较C组升高明显,HDL-C含量较C组下降显著;PG大鼠肝组织中FFA、TG、TC含量较C组增加显著;肝脏脂质沉积较C组加深,脂肪空泡数量大幅度增加;以上指标中C D组较C组比较无差异;PG D组、PG XS组与PG组相比可显著降低大鼠血清中TC、TG和LDL-C含量,升高HDL-C含量,降低肝组织中FFA、TG、TC含量,缓解肝组织脂质沉积现象,减少肝脏空泡;PG D组与PG XS组之间比较没有差异性;(2)与C组比较,PG组大鼠血浆中TMAO含量增加显著,肝脏PERK和FOXO1、miR-33a mRNA相对含量明显增加,肝脏SREBP-2、ABCA1基因mRNA和蛋白表达均降低显著;以上指标中C D组较C组比较无差异;PG D组及PG XS组与PG组相比可显著降低大鼠血浆中TMAO含量,降低肝脏PERK和FOXO1、miR-33a mRNA表达,升高肝脏SREBP-2、ABCA1基因mRNA和蛋白表达;PG D组与PG XS组之间无明显差异性。 结论 TMAO可能通过PERK/FOXO1轴调控SREBP-2/miR-33a/ABCA1信号通路引起大鼠肝脏脂代谢紊乱,香砂六君子汤可能通过抑制TMAO含量达到抑制肝脏脂代谢紊乱的目的。

      • 1
    • 基于血清代谢组学研究黄连解毒汤对SD大鼠胆汁酸代谢的影响

      杨光勇, 杜海洋, 张庚鑫, 苏钢, 涂小华, 何光志

      Abstract:

      目的 通过血清非靶向代谢组学技术研究黄连解毒汤对健康SD大鼠生理功能的影响。方法 大鼠24只适应性喂养7d后,随机分为空白(N)组、黄连解毒汤高剂量(H)组、中剂量组(M)组、低剂量组(L)组,6只/组。N组灌胃生理盐水,H、M、L组分别按照6.25 g/kg、3.125 g/kg、1.56 g/kg剂量灌胃,以上4组均是1 mL/次,2次/d,连续21d。采取大鼠血清样本前禁食禁水12 h,经麻醉后腹主动脉取血并分离血清。通过GC-TOF-MS检测各组大鼠的血清中代谢产物变化,采用多元分析OPLS-DA以及单变量统计学方法筛选其差异代谢物,再经过MetaboAnalyst平台进行代谢通路分析。结果 与N组相比,H、M、L组大鼠血清中显著改变的代谢小分子主要有胆固醇、胆酸、核糖、白皮杉醇、皮质醇、油酸、琥珀酸、亚麻酸、醋酸和丙酮醇等(P <0.05)。相关分析表明黄连解毒汤能显著影响机体的初级胆汁酸代谢、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢、α-亚麻酸代谢、甘油磷脂代谢,且其发挥体内作用可能与摄入的剂量有关,为深入揭示黄连解毒汤促进胆汁酸代谢的作用机制提供一定参考。结论 黄连解毒汤能促进体内初级胆汁酸生成并增强胆汁酸代谢通路的作用。

      • 1
    • 脾虚湿蕴证溃疡性结肠炎模型构建及T淋巴细胞变化的研究

      肖秋萍, 钟友宝, 喻松仁, 李姗姗, 罗小泉, 陈丽玲, 刘漩

      Abstract:

      目的 构建脾虚湿蕴证溃疡性结肠炎小鼠模型及探明T淋巴细胞在该模型中的特征。方法 C57BL/6小鼠,随机分为Control、番泻叶(FXY)组、3%DSS组、FXY+3%DSS和FXY+2%DSS组。采用DSS联合番泻叶建立脾虚湿蕴证溃疡性结肠炎小鼠模型,造模结束后,HE染色观察结肠组织结构变化;Elisa法检测结肠组织炎性细胞因子的浓度,流式细胞术测定CD4/CD8 T淋巴细胞、Th1/Th2、Th17/Treg细胞水平。结果 FXY组小鼠的临床症状以腹泻为主,3%DSS小鼠便血为主,而FXY+3%DSS和FXY+2%DSS组小鼠表现出腹泻和便血同行,但FXY+3%DSS组小鼠生存率低至50%。与Control组比较,3%DSS、FXY+3%DSS和FXY+2%DSS组体重、结肠长度及抗炎性细胞因子IL-10、TGF-β1浓度均显著降低,而DAI、结肠重量、促炎性细胞因子TNF-ɑ、IL-1β、IL-6浓度均显著上升; FXY+3%DSS和FXY+2%DSS组肠系膜淋巴结中的CD4、Th1、Th17细胞百分比显著上升,而CD8、Th2、Treg细胞显著下降。 结论 番泻叶联合2%DSS诱导能成功构建脾虚湿蕴证溃疡性结肠炎小鼠模型,并表现出典型的CD4/CD8、Th1/Th2、Th17/Treg细胞失衡特征。

      • 1
    • 斑马鱼模型在神经退行性疾病研究中的应用进展

      刘延英

      Abstract:

      【摘要】 随着老龄化社会的进程,神经退行性疾病发病率呈现逐年上升趋势。斑马鱼因拥有其他模式动物所不具有的优点,如独特的生长发育方式、经济易繁殖、与人类基因高度相似等,在过去的几十年中,斑马鱼作为模式动物被广泛用于医学和生命科学的各个研究领域。本文就近几年斑马鱼在几种常见的神经退行性疾病,包括阿尔兹海默病、帕金森氏病、亨廷顿氏舞蹈症、肌萎缩性侧索硬化症、脊髓性肌萎缩、遗传性痉挛性截瘫及其它神经系统相关疾病的研究应用进行综述,分析和总结了斑马鱼作为一种理想模式动物的研究现状及进展,指出在神经退行性疾病的机制研究和治疗药物的大规模筛选方面,斑马鱼具有广阔的应用前景。

      • 1
    • 胃溃疡中医证候动物模型研究进展

      王雯, 侯雨君, 王路, 鄢香芸, 李艳秋, 孙路强, 陈帅, 石云舟, 郑倩华, 李瑛

      Abstract:

      胃溃疡是一种常见的消化系统疾病,中医药治疗该病效果显著,但其治疗机制至今尚未明确。建立一套科学客观的胃溃疡中医证候动物模型及模型评价体系,对促进中医药在此领域的发展以及进一步的研究具有重大意义。笔者对近10年中医药治疗胃溃疡相关文献进行整理,总结和分析了胃溃疡中医证候动物模型的制作与评价方法,对肝胃不和证、脾胃湿热证、胃络瘀阻证、脾胃虚寒证、胃阴不足证、肝郁脾虚证等动物模型的制作方法进行总结,发现目前的胃溃疡动物模型存在中医辨证分型不够统一、造模思路与证型局限、造模方法标准不一、模型病证结合不紧密、模型评价体系不规范等问题,并提出模型改进意见,以期为此领域的研究提供参考。

      • 1
    • 强直性脊柱炎食蟹猴膝关节及肠道组织病理变化分析

      黄玉叶, 蔡艳贞, 蔡春梅, 祝合朋, 丁煌冠, 肖文德, 陈珺, 卢丽

      Abstract:

      目的:强直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis,AS)是一种免疫介导的累及中轴关节、周围关节和肠道的慢性疾病,但外周膝关节和肠道的病因病机一直未明。本研究旨在研究AS食蟹猴膝关节和肠道主要病理变化及机制。方法:通过组织形态学分析及免疫组化实验,研究AS外周膝关节及肠道组织的关键特征并初步分析其发病机制。结果: AS食蟹猴外周膝关节病理特征在早期主要表现关节表面软骨侵蚀,软骨下骨暴露,关节表面呈锯齿状;晚期主要表现为软骨表层肥大软骨细胞异位增生,通过软骨成骨和纤维成骨形成骨赘,软骨基本丢失。软骨和血管中MMP-3的表达上调,引起软骨破坏并刺激血管增生。AS食蟹猴小肠绒毛严重萎缩且隐窝增生明显,空肠和回肠的黏膜肠腺中可见大量γδ T细胞。结论:本研究对AS食蟹猴膝关节和肠道的病理分析,获得了该自发模型膝关节与肠道组织的关键特征,并提出可能的发病机制。为探讨AS的骨骼病变与外周疾病之间的潜在关联,为AS的治疗提供新的见解。

      • 1
    • Langendorff心脏灌流技术(针对心肌缺血再灌注 )的应用和发展

      李楠, 张晨, 孙艳君, 高晟伟, 李多静, 王心蕊, 王保和

      Abstract:

      Langendorff离体心脏灌流模型技术具有可重复性强、给药方便和技术要求低等特点,常被用于研究心肌缺血再灌注损伤疾病。该模型排除了其他器官系统、神经系统或体液等影响。本文对该技术的步骤、动物的选择、灌流模式、灌注液的选择、检测的指标、缺血方式以及缺血和灌流时间的选择等方面进行了综述和优缺点的评价。

      • 1
    • 新饮片肉豆蔻曲的组成方新“二神丸”的止泻作用研究

      范蒙蒙, 李凯

      Abstract:

      目的 评价肉豆蔻曲其代替麸煨肉豆蔻组成方新二神丸的止泻作用。方法 将昆明小鼠随机分为正常组、模型组、二神丸Ⅰ组(盐补骨脂+麸煨肉豆蔻)、二神丸Ⅱ组(盐补骨脂+肉豆蔻曲)、二神丸Ⅲ组(盐补骨脂+肉豆蔻生品)、盐补骨脂组、肉豆蔻曲组,采用“氢化可的松+番泻叶”的复合造模方法建立脾肾阳虚泄泻小鼠模型,观察各组小鼠一般体征、各脏器病理变化,检测小鼠各脏器指数、小肠推进率、胃残留率、血清胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)、肾上腺酮(CORT)、促甲状腺激素(TSH)、睾酮(T)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)水平,对粪便微生物进行16S rDNA测序及信息分析。结果 造模后,与正常组相比,模型组小鼠体质量减轻,活动量减少,小肠推进率显著升高,胃残留率、各脏器指数均显著降低,血清GAS、CORT、TSH、T水平均显著下降、MTL、TNF-α、IL-β水平均显著上升,肠道菌群物种多样性降低;给药后,各给药组小鼠上述指标和症状均有不同程度改善,且二神丸Ⅱ组整体上优于二神丸Ⅰ组、二神丸Ⅲ组、盐补骨脂组及肉豆蔻曲组。结论 肉豆蔻曲与盐补骨脂配伍使用对脾肾阳虚泄泻的作用效果显著,肉豆蔻发酵后能减少其毒性风险,增强其温脾止泻作用,为肉豆蔻曲的开发奠定基础。

      • 1
    • 卵巢癌动物模型的特点及应用分析

      易楚, 詹莎, 马昕怡, 伍洋杰, 布筠艺, 马民, 颜显欣

      Abstract:

      【摘要】目的 研究卵巢癌动物模型的特点及应用现况,为当下的卵巢癌模型的规范化制备提供参考指导。方法 通过在从中国知网、万方、维普以及PubMed数据库中以“卵巢癌”和“动物模型”为主题词,PubMed数据库中检索建库至2023年3月1日的卵巢癌动物实验性期刊文献,均进行建库至今的文献搜索,共收集相关文献共1428篇。从实验动物种类、年龄、实验造模方法、检测指标等方面进行总结,建立数据库进行系统分析。结果 筛选后共获得符合标准的实验性研究文献178篇。构建建立卵巢癌动物模型多选用BALB/c品种的雌性鼠;大部分选择在4 ~ 6周,6~8周周龄;造模方法使用最普遍的是异位移植,多接种在腋部皮下;在卵巢癌动物模型造模方法的使用上,以移植性模型使用最多,其中异位移植远高于原位移植的使用量;使用的细胞株或卵巢癌组织多为人源。检测指标检测最多的是肿瘤组织的外观指标、肿瘤病理及免疫组化。结论 卵巢癌动物模型在卵巢癌研究中应用广泛,但缺少专业规范的制备和评价标准,本文通过文献整理、数据归类分析,对卵巢癌的动物模型应用现状进行了详细分析,以期为构建规范化卵巢癌动物模型提供参考。实验多选用BALB/c品系鼠,以浓度为每毫升1×107个的人卵巢癌SKOV3细胞注射于腋部皮下进行为期10 d异位移植造模,短时间内能获得大量模型,成瘤率高且个体差异小,可为研究卵巢癌提供参考。

      • 1
    • 慢性阻塞性肺疾病合并慢性肾病大鼠模型建立与评价

      范正媛, 李亚, 李素云, 李高峰, 李景梅

      Abstract:

      目的 建立与评价慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并慢性肾病(CKD)大鼠模型。方法 将40只SPF级SD大鼠随机分为对照组(Control组)、COPD组、CKD组、COPD合并CKD模型组(COPD CKD组),每组10只。采用香烟烟雾暴露联合细菌滴注法制备COPD大鼠模型,利用腺嘌呤诱导建立CKD大鼠模型,两种方法协同制备COPD合并CKD的大鼠模型,8周后取材检测肺、肾功能,组织形态学及血清炎症因子的表达水平。结果 造模成功后COPD CKD组大鼠肺功能指标FVC、FEV0.1及FEV0.1/FVC显著降低(P<0.01),肺组织病理学表现为肺泡壁断裂、融合的肺气肿改变及炎细胞浸润;血Cr、BUN及24 h尿蛋白显著升高(P<0.01),肾组织病理学表现为肾小球系膜增生,基底膜增厚,肾小管扩张及间质纤维化,超微结构显示肾小球毛细血管襻部分闭合,足突融合,肾小管线粒体融合崩解,溶酶体增多;血清IL-6、IL-13、IL-1β和TGF-β1水平显著升高(P<0.01),且明显高于单一模型组(P<0.01)。结论 采用香烟烟雾暴露联合细菌感染合并2.5%腺嘌呤诱导的方法可成功构建COPD合并CKD的大鼠模型,炎性反应可能在COPD合并CKD过程中起关键作用。

      • 1
    • 病证结合的功能性消化不良动物模型的研究进展

      刘昊, 王馨嫒, 李文静, 吴亚轩, 王晨琪, 肖洪玲

      Abstract:

      功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)是以胃和十二指肠区域功能障碍为主的非器质性疾病,中医学将其归为“痞满”和“胃脘痛”等范畴,并分为脾虚气滞、脾胃虚寒(弱)、脾胃湿热、肝胃不和与寒热错杂等证型。中医药治疗FD效果明显且接受度高,而病证结合的动物模型是开展相关研究基础和前提。因此,本文对现有的FD病证结合动物模型的研究进行整理和归纳,对具体造模方式和评价指标的选择原因进行探讨,同时提出目前研究的不足之处,以期为今后FD病证结合动物模型的研究提供支持。

      • 1
    • 胶原蛋白肽联合海藻酸钠通过下调NLRP3炎症小体表达改善小鼠宫腔粘连

      程怡怡, 赵伟伟, 宋振峰, 童福雯, 刘刚, 张花, 施磊磊, 郭志坤, 王现伟, 潘莹, 孙永琨

      Abstract:

      【摘要】 目的 探讨胶原蛋白肽(collagen peptides,CP)联合海藻酸钠(sodium alginate, SA)对子宫内膜损伤的修复作用及机制。方法 将48只SPF级雌性C57BL/6N小鼠随机分为假手术组(sham)、模型组(model)、治疗组(CP SA),各16只。模型组采用微创法经小鼠子宫颈向宫腔注射95%乙醇造成子宫内膜损伤,制备小鼠宫腔粘连模型;假手术组向宫腔注射0.9%生理盐水;治疗组向宫腔注射95%乙醇后给予宫腔注射CP SA混合液。于造模7天后每组分别取8只小鼠采集样本用于各项检测。HE染色观察小鼠子宫组织病理形态学变化;改良Masson三色染色观察子宫内膜纤维化情况;Western blot检测子宫组织中炎症因子NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达水平;ELISA检测小鼠血清中炎症因子IL-1β、IL-18的表达。各组剩余的8小鼠按照雄雌比例为1:2合笼,记录各组小鼠妊娠数量,于妊娠第14天处死妊娠小鼠,记录胚胎数量。结果(1)与假手术组相比,模型组小鼠子宫内膜厚度变薄,子宫内膜纤维化增加,并有炎症细胞浸润。此外,模型组子宫组织中炎症因子NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达水平以及血清中炎症因子IL-1β和IL-18水平均显著高于假手术组(P<0.05)。(2)与模型组相比,治疗组小鼠子宫内膜损伤程度、子宫内膜纤维化程度及炎症细胞浸润均减轻;此外,治疗组子宫组织中炎症因子NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达水平及血清中炎症因子IL-1β和IL-18水平均显著低于模型组(P<0.05)。(3)与假手术组相比,模型组小鼠生殖能力下降(P<0.05);与模型组相比,治疗组小鼠生殖能力明显改善(P<0.05)。结论 CP和SA联合应用可有效改善宫腔粘连模型小鼠子宫组织病理改变,减轻子宫内膜损伤、炎症反应及纤维化程度,改善小鼠生殖能力,其作用机制可能与下调NLRP3炎症小体表达有关,为CP和SA联合应用治疗宫腔粘连提供可靠的实验依据。

      • 1
    • 小鼠支气管肺泡灌洗术研究进展

      吴志豪, 杨露银, 任维, 周雅楠, 王红, 雷云, 于红, 杨思进

      Abstract:

      支气管肺泡灌洗术是研究呼吸系统疾病的一项重要技术,已经在疾病研究中得到广泛运用,目前,临床患者的支气管肺泡灌洗操作流程已经逐步规范化,而小鼠作为研究肺部疾病重要的模型动物之一,尚缺乏针对小鼠的支气管肺泡灌洗液标准采集和检测流程,不规范的流程会阻碍该技术在研究中的推广和应用,同时也会影响实验结果的准确性和可靠性。本文对国内外研究中小鼠支气管肺泡灌洗方法进行了系统的总结,以期为研究者今后运用并建立规范的灌洗流程提供参考和指导。

      • 1
    • 白蛋白相关药物动物模型的研究进展

      资崯, 宁丽, 唐成程, 周小青

      Abstract:

      许多肽或蛋白质药物治疗的一个主要挑战是它们的血浆半衰期短。通过将该类药物与白蛋白结合获得的药物称为白蛋白相关药物,这样的结合可以有效延长其血浆半衰期。动物模型作为研究药物药代动力学的重要工具是药物研究中不可或缺的一部分。本综述概括了两大类动物模型;啮齿类(野生型小鼠,大鼠模型,基因修饰小鼠模型)与非啮齿(猴)在白蛋白相关药物药代动力学研究中的应用与发展,为其进一步研究发展提供参考。

      • 1
    • 不同干预因素建立小鼠动脉粥样硬化模型的研究进展

      白旭峰, 曹清雨, 胡慧明, 王姝雯, 刘亚丽

      Abstract:

      动脉粥样硬化(AS)是常见心脑血管疾病的潜在危险因素,严重威胁着人类的健康和生命。AS的防治和抗AS的新药研发是医药学界一直以来关注的热点。选择理想的AS动物模型是研究AS防治措施及中药新药研发的关键。理想的AS动物模型应是与人类AS发病机理相似,病理及生化反应一致,且AS模型复制的重复性高、操作简便、易于推广。小鼠具有繁殖性强、遗传性高、可塑性好、AS成模性快等特点,成为了AS研究的理想动物。本文就不同干预因素建立小鼠AS模型的复制方法进行了比较分析,以期为开展AS的防治和中药新药研发提供参考和思路。

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    • 《这里是中国》读后感

      Abstract:

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      • 1
    • 无菌动物在肠道微生物组研究中的应用与发展

      胡雅谦, 王珊珊, 张童, 袁嘉丽, 牛海涛

      Abstract:

      近年来,随着宏基因组概念的提出,人类宏基因组学也成为了揭示人体发育与健康的新途径。肠道微生物组作为人体内最大的微生物区系,已经被发现在人体正常生理功能和疾病的发生发展中具有重要的作用。肠道菌群有着丰富的种类及数量,在有关于肠道微生物组的研究中,无菌动物的应用使实验更具准确性,也更加便利,是一种比较理想的基础动物模型,不仅如此,在此基础上发展的模型也对该类研究有着重要意义。本综述就对无菌动物的认识、无菌动物在实验研究中的应用以及无菌动物模型的前景等方面,回顾无菌动物在肠道微生物组中的应用与发展。

      • 1
    全选
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    2024年第32卷第4期
      研究进展
    • 罕园园, 代解杰

      2016,24(3):321-326, DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2016.03.020

      Abstract:

      抑郁症在全球范围内高发,目前尚无有效的治疗手段,使其成为全球性卫生问题之一。抑郁症动物模型作为疾病机理研究以及药物筛选的主要手段,一直以来备受关注,现有的抑郁模型创新性地融合了比较行为学以及最新的分子生物学等相关技术。本文将结合模型的表面效度、结构效度及预测效度对现有的抑郁症动物模型及发病机制研究的最新进展进行综述,主要包括应激模型、损伤模型、化学诱导模型及转基因模型,这些模型均能不同程度的模拟人抑郁症的特征,在抗抑郁药物开发及发病机理研究中发挥重要作用。

    • 研究报告
    • 武亚琦, 钟根深, 吴敏娜

      2015,23(3):249-255, DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2015.03.006

      Abstract:

      目的 分析小鼠粪便及肠道各部位内容物细菌群落结构差异,探讨粪便取样研究肠道微生物与疾病关系的科学性和客观性,为相关实验设计提供参考。 方法 利用末端限制性片段长度多态性(T-RFLP)、变性梯度凝胶电泳(DGGE)和荧光定量PCR(qPCR)技术对BALB/c小鼠肠道不同部位(十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠)内容物及粪便中细菌群落组成和丰度进行比较,分析细菌群落在小鼠粪便及肠道各部位的分布差异。 结果 粪便与直肠、结肠中优势片段均为244、255 bp和449 bp,而小肠内容物(十二指肠、空肠及回肠)的优势片段则为60、73、261、268 bp和272 bp,且小肠各部位之间细菌群落结构差异较大;十二指肠和空肠内容物中的细菌丰度较低,分别为6.9 log (copies)/g和8.3 log (copies)/g,而粪便中细菌丰度高达11.8 log (copies)/g,约2倍于十二指肠细菌丰度,显著高于十二指肠和空肠(P < 0.05),与大肠各部位及回肠内容物细菌丰度相当,差异不显著(P > 0.05)。结论 大肠各部位内容物和粪便的细菌群落结构相似,个体差异较小肠小,适合通过粪便取样进行大肠部位特别是结直肠的肠道微生态与某些疾病的相关分析。

    • 陈朝阳, 姚茹, 王璐, 王晨阳, 郭民, 宋国华, 张锐虎

      2018,26(3):343-348, DOI: 10.3969/j. issn. 1005 -4847. 2018. 03. 012

      Abstract:

      目的 探讨莲心碱对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)的作用?方法 BALB/ c 小鼠随机分为对照组?LPS 组?LPS + 莲心碱(2?4?8 mg/ kg) 组?地塞米松(5 mg/ kg)组,鼻腔滴入法建立LPS 诱导的急性肺损伤模型?12 h 后,组织学观察肺组织的病理学变化;ELISA 检测肺泡灌洗液(BALF)中TNF?α?IL?6 和IL?1β 的含量;Wright?Giemsa 染色检测BALF 中中性粒细胞数;BCA 法检测总蛋白含量;Evans blue 检测肺毛细血管通透性;分光光度法检测肺匀浆上清中MPO 的活性?MDA 的含量?SOD 的活性?GSH 的含量;流式细胞术检测肺组织中ROS 的含量?结果 LPS 组可见肺组织具有炎性细胞浸润?支气管肺泡壁增厚和肺充血现象,而莲心碱组可以改善肺损伤情况;LPS 组BALF 中TNF?α?IL?6?IL?1β 的含量明显增加?中性粒细胞数和总蛋白量显著增多,肺毛细血管通透性?MPO 活性和MDA 含量增加,SOD 活性和GSH 含量降低,ROS 含量增加,而莲心碱组能够降低BALF 中TNF?α?IL?6?IL?1β 的含量, 减少中性粒细胞数和总蛋白量,降低肺毛细血管通透性,降低MPO 活性和MDA 含量,增加SOD 活性和GSH 含量,降低ROS 的含量?结论 莲心碱可通过抗炎抗氧化作用保护LPS 诱导的小鼠急性肺损伤?

    • 吴朋朋, 柳森森, 张彩勤, 赵勇, 白冰, 王洁, 师长宏

      2021,29(4):440-447, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2021. 04. 003

      Abstract:

      目的 研究人胃癌转移裸鼠模型中人 Alu 基因的表达水平与组织脏器中胃癌转移程度的相关性, 探索建立胃癌转移模型早期评估的分子生物学方法。 方法 分别以人胃癌细胞 SGC-7901、MKN45 和正常胃黏膜细胞 GES1 基因组 DNA 为模板构建标准质粒,通过实时荧光定量 PCR 检测不同比例胃癌细胞 SGC-7901 中 Alu 基因的表达,获取相关性曲线;选取胃癌细胞 SGC-7901 和 MKN45,通过裸鼠皮下接种的方式构建人胃癌细胞异种移植转移模型,实时荧光定量 PCR方法检测模型鼠肝、脾、肺、肾和皮下肿瘤组织中的人 Alu 基因表达,获得 Alu 基因的表达与各器官组织中肿瘤转移程度的相关性曲线;将临床胃癌患者新鲜肿瘤标本皮下接种裸鼠构建异种移植模型,进一步验证模型鼠各组织中人 Alu 基因的表达与器官中肿瘤转移程度的相关性。 结果 胃癌细胞 SGC-7901 的含量与其 Alu 基因的 Ct 值呈负相关(R2 = 0. 9239);人胃癌细胞异种移植(CDX)裸鼠转移模型中,人 Alu 基因的表达在皮下肿瘤中处于较高水平,在肺转移瘤和肝转移瘤中的表达则介于正常裸鼠与皮下肿瘤之间,与组织病理学检查结果相符;胃癌病人肿瘤异种移植(PDX)模型中,已确定发生转移的脏器中虽未形成肉眼可见的转移灶,但其人 Alu 基因的表达(Ct 值 17. 86)与正常裸鼠(Ct 值 22. 18)差异显著(P< 0. 05);而对于肉眼可见的转移灶,其人 Alu 基因的表达(Ct 值 14. 29)则差异极显著(P< 0. 01)。 结论 人胃癌裸鼠转移模型中,人 Alu 基因的表达与胃癌转移程度呈正相关,Alu 基因表达越高,则该组织中转移的肿瘤细胞就越多,形成的转移灶越明显。

    • 研究报告
    • 丁军颖, 高翔, 洪燕英, 桂红, 韦志友, 丁雪霏, 安世栋, 崔煦然, 郭玉红, 刘清泉

      2017,25(6):600-604, DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.06.003

      Abstract:

      目的 探索铜绿假单胞菌致大鼠肺炎模型的制备方法,为后续研究奠定实验基础。方法 将Sprague-Dawley (SD)大鼠48只随机分为4组:A对照组、B气管注射组、C气管插管感染组和D滴鼻感染组。适应饲喂3 d后,分别给予不同造模干预,分别于干预后5、10和15 d动态监测各亚组大鼠体重、体温、白细胞数、肺组织病理学变化等。结果 各模型组大鼠行为学表现、体重、体温、白细胞、肺组织炎症病理学表现均与对照组差异有显著性;②各模型组均证实为铜绿假单胞菌感染,对照组则阴性。结论 经滴鼻途径以铜绿假单胞菌感染大鼠,可得到合格大鼠肺炎模型;此感染途径可避免手术创口带来的炎症反应干扰,简便易行,可推广。

    • 研究进展
    • 苗晋鑫, 宋韶鹤, 李秀敏

      2020,28(2):0-0, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2020. 02. 018

      Abstract:

      结直肠癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,发病率和死亡率逐年上升且趋于年轻化。 结直肠癌小鼠模型增加我们对人类结直肠癌特征的理解及癌症预防和治疗的研究。结直肠癌小鼠模型可以分为自 发性模型、诱发性模型、移植性模型、转基因模型。 然而,没有一个模型概括了人类结直肠癌的所有特征,使 用特定的结直肠癌小鼠模型来解决特定结直肠癌的研究问题至关重要。本文结合国内外研究文献,对近 20 年不同结直肠癌小鼠模型的造模方法及优缺点的研究进展做一综述,为研究结直肠癌不同目的选择合适的小鼠模型。

    • 研究报告
    • 廖慧丹, 龙玲玲, 闫杰

      2015,23(4):410-414, DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2015.04.015

      Abstract:

      目的 改良并比较机械分离法、胰蛋白酶消化法和木瓜蛋白酶消化法在大鼠皮质神经元培养中的优缺点,为科技工作者根据各自条件选择合适的培养方法提供理论依据。方法 采用胎龄为16~18 d 的SD大鼠胚胎,分别用机械分离、胰酶消化以及木瓜蛋白酶消化三种方法对SD胎鼠皮层神经元进行培养,并对不同培养时间的神经元进行形态学观察和免疫荧光显微镜纯度鉴定。结果 三种方法均能成功培养出杂质少且纯度高的皮层神经元,其在不同生长阶段具有典型的形态学特征。经NSE免疫荧光染色,神经元纯度分别在96.28%,95.63% 及97.34%,三组间无统计学差异(P>0.05)。结论 三种方法均成功培养出杂质量较少且纯度高的皮层神经元,均可作为神经元体外培养的良好实验模型,且三种培养方法都有其不同的特点。

    • 李树民, 张敏, 王朋, 洪凡, 王晨, 张悦, 耿振洋, 杨欣雨, 贺笑笑, 孙影, 杨方

      2018,26(5):548-553, DOI: 10.3969/j. issn. 1005 - 4847. 2018. 05. 002

      Abstract:

      目的 检测C57BL/6 小鼠无创性肺功能指标,为小鼠实验性研究肺功能的监测提供依据?方法 采用整体体积描记法(whole body plethysmography,WBP)检测460 只C57BL/6 小鼠肺功能的各项指标,对检测结果进行统计分析,百分位数法确定参考值范围?结果 小鼠吸气时间(Ti)64. 7(55. 30 ~ 82. 60)ms,呼气时间(Te) 83. 4(71. 70 ~109. 20)ms,呼气峰值时间比率(Rpef)0. 21(0. 16 ~ 0. 28),吸气末端暂停(EIP)2. 19(1. 96 ~ 3. 76) ms,呼气末暂停(EEP)1. 67(0. 12 ~9. 15)ms,潮气量(TVb)0. 44(0. 25 ~0. 58)mL,气道狭窄指数(Penh)1. 29(0. 91~2. 00),呼吸暂停(PAU)1. 18(1. 00 ~ 1. 64),呼气中期流速(EF50)0. 64(0. 30 ~ 0. 98)mL/ s,松弛时间(Tr)39. 0 (32. 40 ~51. 50)ms,最大吸气流速(PIF)9. 74(5. 33 ~12. 83)mL/ s,最大呼气流速(PEF)9. 86(5. 12 ~ 13. 47)mL/ s,呼吸频率(f)412(331 ~474)BPM,每分钟通气量(MVb)174. 4(86. 69 ~235. 04)mL?结论 C57BL/6 小鼠无创肺功能指标参考值范围的测定,可为呼吸系统疾病的基础研究提供实验性参考依据?

    • 叶妙勇, 赵凡, 马轲, 张利棕, 方明笋, 寿旗扬, 马寅锋, 黄文杰, 吕伯东

      2019,27(6):753-759, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2019. 06. 010

      Abstract:

      目的 探讨电刺激阴茎海绵体神经检测海绵体内压方案,并主要比较两种置管材料(PE-50 管针头与静脉输注针)用于检测阴茎海绵体内压(intracavernous pressure,ICP)的差异?方法 选取SPF 级雄性Sprague-Dawley 大鼠36 只,随机选择16 只作为对照组,余20 只为实验组,予腹腔注射链脲佐菌素60 mg/ kg,饲养8 周后筛选出16 只I 型糖尿病大鼠?对照组与糖尿病组再分为使用PE-50 管针与静脉输注针组记录ICP 各8 只?Masson三色染色与阿扑吗啡实验证实糖尿病ED 大鼠模型造模成功?证实模型建立成功后,进行阴茎海绵体内压检测,比较PE-50 管针与静脉输注针记录的相关勃起功能数据?结果 Masson 三色染色显示糖尿病模型组较对照组阴茎海绵体平滑肌面积减少?胶原面积增多?阴茎海绵体平滑肌面积/ 胶原面积减少,差异具有统计学意义( P < 0. 05)?糖尿病模型组较对照组勃起次数明显减少( P < 0. 01)?正常组和糖尿病组使用PE-50 管针与静脉输注针记录的峰值ICP?ICP/ 平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)?曲线下面积(area under curve,AUC) 无统计学意义( P >0. 05),而起峰速率(slope)有统计学意义( P < 0. 05 或 P < 0. 01)?结论 电刺激阴茎海绵体神经记录海绵体内压时,PE-50 管针头与静脉输注针头均适用于阴茎海绵体内压测定?

    • 专题研究
    • 祝明皓, 陆涛峰, 牛银杰, 赵丽丽, 陈洪岩

      2016,24(3):288-292, DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2016.03.014

      Abstract:

      目的 获得巴马猪外周血淋巴细胞中NK细胞的表型及比例的数据,建立一种高效率猪CIK(cytokine-induced killer)细胞体外诱导培养的方法。方法 分离巴马小型猪外周血淋巴细胞,通过检测CD2+/CD8+/CD3-细胞以表征猪NK细胞的表型;通过优化诱导培养条件,提高诱导淋巴细胞中CIK的比例,建立高效率CIK细胞体外诱导方法。结果 利用优化的诱导培养条件,在诱导培养第5天时CD3-/CD2+/CD8+的NK细胞的比例可高达43.63%,较最初分离时NK细胞比例提升了5.59倍;细胞增殖活性实验表明诱导培养第5天时可见明显的3个荧光峰,表明诱导后细胞发生了3次分裂,理论上较最初分离增加了8倍;诱导细胞的qPCR表型分析表明该细胞群体在诱导培养第5天时相关的表面标志有明显的上升也与流式分析结果一致。结论 建立了高效的猪CIK细胞体外诱导培养的方法。

    • 研究进展
    • 马园园, 刘成海, 陶艳艳

      2018,26(3):398-403, DOI: 10.3969/j. issn. 1005 -4847. 2018. 03. 020

      Abstract:

      肾纤维化为慢性肾病发展至终末期肾衰所必经的共同病理路径,病理改变包括肾间质纤维化和肾小球硬化?肾纤维化的理想动物模型对慢性肾病发病机制的研究及其治疗药物的研发等存在现实意义?目前,肾纤维化动物模型包括药物或毒物诱导?手术模型以及基因敲除等多种模型,不同动物模型肾功能?肾组织病理等方面各具特点,尚无法完全模拟人类慢性肾疾病,这提示慢性肾疾病发病的复杂性,对于其病理机制认识与防治具有重要意义?

    • 楚璐萌, 田子颖, 崔蕊, 吴娇, 于海川

      2021,29(1):1-8, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2021. 01. 001

      Abstract:

      目的 本文以斑马鱼(Danio rerio)为研究对象,探讨了低氧对早期胚胎发育、造血分化和红系分化的影响。 方法 选取受精后 12 h 的斑马鱼胚胎,随机分为两组,以常氧组为对照组,低氧组为实验组,实时观察斑马鱼胚胎发育形态学的变化;通过联苯胺染色、邻联茴香胺染色、AO 染色及瑞氏吉姆萨染色观察红细胞的生成及形态学变化;并通过 Real time PCR 检测了斑马鱼胚胎造血相关基因的表达情况。 结果 与常氧相比,低氧降低了斑马鱼胚胎卵黄囊的营养消耗,抑制了色素细胞的形成,减慢了心率,延缓了斑马鱼胚胎的孵化,观察和分析了低氧对红细胞产生和成熟的抑制作用。 结论 低氧延缓了斑马鱼胚胎发育,抑制了红细胞的产生和成熟。

    • 研究进展
    • 庞琳琳, 张会永, 杨关林

      2014,22(1):94-98, DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.01.020

      Abstract:

      广西巴马小型猪作为国内小型猪主要品种之一,具有遗传性稳定、多产、体重较小、体表多覆白毛等特征,组织器官及生化指标与人类相似,已越来越广泛地应用于医学研究领域:猪的心脏解剖与生理特点与人类高度相似,已被广泛应用于心血管系统研究中,在我国,巴马小型猪被用来构建心肌缺血、卵圆孔未闭等心血管疾病模型;猪具有杂食性及与人相似的脂质代谢,可用于研究内分泌疾病,巴马小型猪已用于糖尿病动物模型建立及其遗传易感性、并发症的防治研究等;巴马小型猪的消化系统与人类相似,利用此特点已建立阻塞性慢性胰腺炎、结肠穿孔、胆肠吻合等消化系统疾病模型;巴马小型猪除头、尾外,体表覆以白毛,这一特点使其成为研究皮肤创伤、烧伤修复等的理想动物;小型猪的牙齿解剖结构与人类相似,口裂大,可作为口腔医学研究中的理想动物,巴马小型猪已用来建立牙髓坏死模型及对上颌扩弓方式的研究;类似人的解剖、生理、病理使其成为较为适合的异种移植供体。在中医药研究方面,已用巴马小型猪分别建立了肝脏、脾脏、股动、静脉出血及头颈恶性肿瘤放疗后的腮腺损伤动物模型以研究中药制剂的疗效及机制。

    • 马畅, 郭健敏, 谢松强, 杨威

      2019,27(2):266-270, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2019. 02. 022

      Abstract:

      白血病又被称为“血癌”,其发病的根本特征是白血病细胞在骨髓及其他造血组织中呈恶性?无限制地增生,浸润全身各组织和脏器,产生不同症状,使患者易发生严重的感染或继发性的败血症?引起出血?肠功能衰竭?高尿酸血症等,严重威胁到患者的生命?因此白血病治疗的研究至关重要?利用实验动物进行各种疾病?药物疗效实验的研究,是医药领域发展的一个重要方面?对于白血病的研究,小鼠在生物学?遗传学?造血系统等方面与人类相似,因此是较为理想的动物白血病模型?本文对近五年来国内外研究常用的小鼠白血病模型进行综述?

    • 研究报告
    • 刘瑜婷, 高艳香, 王姗姗, 任卫, 孙维梁, 于长安, 郑金刚

      2017,25(4):399-403, DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.04.010

      Abstract:

      目的 应用β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile,BAPN)饮水联合血管紧张素Ⅱ (angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)皮下埋泵建立小鼠主动脉夹层模型。方法 40只3周龄雄性C57Bl/6J小鼠随机分为两组,均每日给予0.1 g/(kg·bw) BAPN饮水,BAPN饮水后第28天给予皮下埋泵,BAPN饮水+生理盐水埋泵组持续泵入生理盐水,BAPN饮水+Ang Ⅱ埋泵组持续泵入Ang Ⅱ,每分钟1000 ng/(kg·bw)。采用小鼠无创血压测量计尾套法检测小鼠血压和心率。实验中死亡小鼠立即解剖,分离主动脉。埋泵72 h后,未死亡小鼠注射过量戊巴比妥钠处死,留取主动脉。苏木素-伊红染色显微镜下观察主动脉壁假腔形成情况。结果 BAPN饮水+Ang Ⅱ埋泵组小鼠总的夹层发生率为95%,死亡率为24%(夹层动脉瘤破裂死亡),BAPN饮水+生理盐水埋泵组夹层发生率为5%,死亡率为0;镜下主动脉病理切片显示夹层主动脉有假腔形成。结论 成功建立高主动脉夹层发生率的小鼠模型。

    • 张婷婷, 杨漫漫, 魏强, 李燕莉, 李林, 王然, 胡莉花, 姜芳芳, 刘瑜, 赵卫华, 李勇

      2020,28(6):779-787, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2020. 06. 007

      Abstract:

      目的 将人地贫相关基因 HBB(hHBB)的高频突变体基因型 Condons41 / 42(-CTTT)靶向敲入猪成纤维细胞,并筛选出基因型阳性的纯合子细胞系。 方法 (1)合成人地贫相关基因 HBB( hHBB)突变体,并构建猪 HBB 位点两条同源臂载体。 (2)利用 infusion 技术将 hHBB 突变体插入两个同源臂之间,构建同源重组终载体。 (3)用在线软件 http: / / crispr.mit.edu / 设计靶向猪 HBB 的 sgRNA,并在猪 PK15 细胞中验证其活性。 (4)利用电转染法把 CRISPR/ Cas9、sgRNA 和目的载体共同转入巴马猪胎儿成纤维细胞中,筛选单细胞克隆。 结果 (1)合成了 hHBB 突变体,从野生型巴马猪基因组上扩增左同源臂(1. 062 × 10P>3P> )以及右同源臂(1. 024 × 10P>3P> ),并将三者连接 到终载体 pGH-LA-hHBB-RA。 (2)设计合成了 11 条靶向猪 HBB 基因的 sgRNA,全部验证活性后最终挑选#2sgRNA 和#11sgRNA 用于后续实验。 (3)通过 CRISPR 系统共制备出 15 株有 hHBB 突变体定点敲入的猪成纤维细胞系,其中 6 株细胞正常表达 hHBB 基因。 结论 本研究所制备的携带人源化 HBB 基因突变体的猪成纤维细胞,将为创制高度模拟人地贫的模型猪奠定基础。

    • 研究报告
    • 陈漫漫, 高鹏飞

      2020,28(1):100-107, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2020. 01. 015

      Abstract:

      目的 自制小鼠束缚装置,建立产后小鼠束缚应激模型供相关应激实验研究。 方法 选择规格适 合小鼠身型的离心管,制备简易小鼠束缚装置。在小鼠产后第 2 天,使用该装置固定产后母鼠于装置内,限制其行动。 在母子分离的基础上,每天给予母鼠 3 h 的束缚应激,连续造模 21 d 即可制备产后小鼠束缚应激模型。 结果 该产后小鼠束缚应激模型,其胃、下丘脑以及血清内 ghrelin 表达量增加,5-HT2 受体等基因表达量减少,并且具有运动量减少等抑郁样症状和子代生长发育迟缓现象。 结论 本文介绍产后小鼠束缚应激模型,经过多次实验证明,造模结果具有良好的稳定性和可重复性,可供相关小鼠束缚应激实验研究。

    • 潘永明, 金平, 徐剑钦, 刘军平, 蔡兆伟, 许茂盛, 陈民利

      2017,25(4):356-361, DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.04.003

      Abstract:

      目的 基于3.0 T磁共振成像(MRI)技术,活体观察WHBE兔脑部形态解剖结构,累积WHBE兔脑的影像学基本生物学数据,为进一步拓宽WHBE兔的应用提供背景资料。方法 成年雄性WHBE兔9只,用3%戊巴比妥钠溶液静脉注射麻醉,行3.0 T MRI加兔脑专用线圈常规横断面和矢状面扫描,并测量分析脑部的各种结构大小。结果 MRI扫描可成功获得活体WHBE兔脑矢状面和横断面T2WI或T1WI图像,可完整清晰地观察到活体WHBE兔的嗅球、大脑、小脑和垂体等基本结构,并发现了4只兔脑T2WI中左右两侧颞叶海马区高信号,相应区域在T1WI出现低信号外,其余均无异常。同时,获得了额叶、海马、大脑、侧脑室、垂体等相关解剖结构的参考值。结论 采用3.0 T磁共振成像系统加上兔脑专用线圈,可以清晰地观察到WHBE兔脑部的各种形态解剖结构,并初步建立了WBHE兔脑影像学基本数据。

    • 黄树武, 闵凡贵, 王静, 罗银珠, 何丽芳, 陈梅玲, 潘金春

      2021,29(6):777-784, DOI: 10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2021. 06. 009

      Abstract:

      目的 对 6 种常用品系小鼠和大鼠肠道菌群进行比较研究。 方法 采集 3 家实验动物生产单位 150 只 SPF 级小鼠和大鼠的 210 份粪便或肠道内容物样本,依据细菌 16S rDNA V3-V4 区域通用引物对样本进行 PCR 扩增,并采用 Illumina Hiseq 2500 高通量测序平台进行测序。基于动物来源、品种品系、性别、年龄和肠道分段 (十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠)等因素,运用生物信息学分析方法对小鼠和大鼠肠道菌群结构组成多样性及差异性进行聚类分析。 结果 来源相同的实验小鼠或大鼠的肠道菌群间相似性最高,而实验小鼠与大鼠的肠道菌群因品种不同存在差异性。 实验小鼠不同肠段的肠道菌群有一定差异性,其粪便样本与其结肠肠道菌群的相似性较高。 相同饲养生存环境条件下,实验小鼠的年龄和肠道肠段是决定动物肠道菌群结构的主要内源性因素, 而品系、性别对其肠道菌群的影响作用较小。 结论 本研究揭示了常用品系小鼠和大鼠肠道菌群的多样性与差异性,探讨宿主肠道菌群的相关影响因素,为肠道菌群与疾病关系的相关研究提供更多基础数据。

    • 研究报告
    • 李媛, 赵光明, 董建勋, 路广林, 张旭辉, 王乐平

      2014,22(1):63-66, DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.01.012

      Abstract:

      目的 观察不同造模方法致糖尿病大鼠慢性皮肤溃疡创面形态及愈合时间的影响。方法 50只SD大鼠随机分为5组:皮肤缺损组(QS组:剪皮),糖尿病组(DM组:STZ+剪皮),糖尿病加金黄色葡萄球菌组(DMJJ组:STZ+剪皮+金葡菌),糖尿病加激素组(DMJS组:STZ+剪皮+激素注射),糖尿病加激素加异物组(DMYW组:STZ+剪皮+激素注射+异物埋置)。糖尿病模型稳定后每周测量血糖1次,每日称量体重、观察疮面情况、测量创面面积。12 d后处死,石蜡包埋肉芽组织观察其组织病理形态。结果 DMJJ组前5d愈合速度快于其余组(P<0.01);DMYW组的愈合时间延长,DMYW组愈合率显著偏低,与其余组比较有统计学意义(P<0.01)。造模12 d其余组愈合率无统计学差异,DMYW组愈合率显著低于其余组(P<0.01)。结论 注射激素大鼠表现出中医“阴证”证型特点,糖尿病加激素注射加异物埋置复合因素造模法能使大鼠创面表现出与临床相似的“阴证”证型特点。

    主管单位 :中国科学技术协会

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    主编:秦川

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